李树根，刘坤东，王浩楠，姚晓玲，苏宁

（广州中医药大学基础医学院，广东广州 510006）

失眠，又称睡眠障碍（Sleep disorder，SD），是以频繁而持续的入睡困难或睡眠维持困难并导致睡眠满意度不足为特征的睡眠障碍。失眠表现为入睡困难、睡眠维持障碍、早醒、睡眠质量下降和总唾眠时间减少，并伴有日间功能障碍，是当代社会的一个公共健康问题，病程较长且较难治愈，严重者还可诱发和加重心脑血管疾病，而且常与精神健康问题密切相关，失眠影响了全球约30%~40%的人群[1]。

2017年中国睡眠研究会制定“中国失眠症诊断和治疗指南”，提出心理治疗是失眠治疗首选，药物治疗应在心理治疗的前提进行。长期药物治疗具有依赖性、副作用等问题，心理治疗在国内普遍率不高。中医药在治疗失眠上积累了丰富经验，而且中药具有不良反应小、无药物依赖性等优势。沉香为瑞香科植物白木香含有树脂的木材，作为中药，具有行气止痛、温中止呕、纳气平喘的作用[2]。现代药理研究提示沉香含镇静中枢神经作用的成分：沉香挥发油通过蒸汽吸入对小鼠给药，结果显示具有抗焦虑作用[3,4]；沉香气体吸入给药对失眠小鼠具有一定质量作用，能改善睡眠[5]；王帅等[6]通过实验发现沉香挥发油、醇提物具有镇静催眠作用；雷莉等[7]通过沉香熏香的疗法治疗120例失眠障碍患者，结果发现沉香熏香能显著改善患者睡眠质量、减轻失眠的严重程度。以沉香为原料制作的沉香茶，是新一代纯天然绿色健康饮品，有学者以沉香为主原料制备具有安神、温中、暖肾、纳气等功效的沉香茶[8]。上述研究均提示沉香具有镇静催眠的作用，但缺乏作用机制的研究。本文以沉香提取物为研究对象，观察沉香提取物对PCPA致失眠大鼠脑镇静催眠的作用，并探讨其治疗失眠的作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料

研究动物：SPF级SD大鼠90只，雌雄各半，体质量180~220 g，由广州中医药大学实验动物中心提供，合格证号：00202800，许可证号：SCXK(粤)2013-0034。饲养于广州中医药大学实验动物中心屏障环境（SPF级），室温23~25 ℃，湿度55%~60%，12 h昼夜交替，实验单位使用许可证编号：SYXK(粤)2018-0085。本文研究所做实验均获得伦理委员会批准。

主要试剂：对氯苯丙氨酸（PCPA，批号：L1727016），上海阿拉丁生化科技股份有限公司；大鼠5-HT、DA、NE、GABA、Glu酶联免疫吸附测定试剂盒（批号：Oct 2018），上海江莱生物科技有限公司；Maker I DNA Ladder（批号：M1100）、琼脂糖（批号：A8201），北京索莱宝科技有限公司；逆转录试剂盒（批号：11119ES60）、PCR预混合溶液2×HieffTM PCR Master Mix（批号：10102ES03），上海翊圣生物公司；TAE（批号：680959191），biosharp公司；伊红染色液（批号：No.20180920），北京索莱宝科技有限公司；苏木素染色液（批号：No.20181025），北京索莱宝科技有限公司。

1.2 仪器

主要仪器：挥发油采集器、循环水式多用真空泵，郑州长城科工贸有限公司；旋转蒸发仪R-1001N，郑州长城科工贸有限公司；CA-1115A冷去水循环装置，上海爱郎仪器有限公司；真空冷冻干燥机，广州贝立思仪器有限公司；Heal Force低温高速离心机，力康生物医疗科技控股有限公司；iMark酶标仪，美国BIO-RAD公司；自制雾化吸入箱；超声雾化器，江苏鱼跃医疗设备股份有限公司；OLYMPUS显微镜，日本奥林巴斯公司；凝胶成像系统，美国BIO-RAD公司；PCR仪器T100 Thermal Cycler，美国BIO-RAD公司；电泳系统，美国BIO-RAD公司。

1.3 方法

1.3.1 沉香提取物溶液制备

沉香由广东宝盛沉香制品有限公司提供，经广东宝盛沉香制品有限公司鉴定为正品。沉香挥发油：取沉香药材，适当粉碎，过3号筛，准确称取50 g粉末于1000 mL圆底烧瓶中，加入500 mL蒸馏水，利用挥发油采集器提取，待煮沸后调至微沸状态煎煮6~8 h，关闭电源，待温度降至室温时收集挥发油，4 ℃储存备用。沉香醇提物：取沉香药材，适当粉碎，过3号筛，准确称取50 g，加入500 mL 95%乙醇，室温浸泡48 h后，过滤，收集滤液，滤液减压浓缩后用适量95%乙醇复溶，均匀倾倒于表面皿中，置于-80 ℃冰箱过夜，次日取出于冻干机中冻干过夜。24 h后收集冻干粉末，-20 ℃储存备用。沉香水提物：取沉香药材，适当粉碎，过3号筛，准确称取50 g，加入500 mL蒸馏水煎煮6~8 h提取，煮完后过滤，所得滤液浓缩至50 mL，即为1 g/mL的沉香水提物，4 ℃储存备用。

1.3.2 建模及分组

大鼠适应性喂养3 d后，腹腔注射PCPA混悬液（350 mg/kg），1次/d，连续2 d。于第一次腹腔注射36 h后，大鼠失去正常昼夜节律，白天夜间皆活动不停，表示模型复制成功。

将90只实验大鼠按雌雄分别进行编号1~45，然后分别称重，记录好体重数据，并将体重数据的结果按编号输入EXCEL表格，按体重从小到大重新排序，运用公式RAND进行随机分组，随机分成空白组10只、模型组10只、沉香挥发油高剂量组10只、沉香挥发油低剂量组10只、沉香醇提物高剂量组10只，沉香醇提物低剂量组10只，沉香水提物高剂量组10只，沉香水提物低剂量组10只，地西泮组10只，以上分组均是雌雄各半。空白组、模型组以等体积生理盐水灌胃，每天1次。沉香醇提物低剂量组（0.5 g/kg，按生药量计）、沉香醇提物高剂量组（2 g/kg，按生药量计）、沉香水提物低剂量组（0.5 g/kg，按生药量计）、沉香水提物高剂量组（2 g/kg，按生药量计）、地西泮组（2 mg/kg）根据相应浓度灌胃等体积灌胃，每天1次。沉香挥发油低剂量组（50 μL）、沉香挥发油低剂量组（100 μL）采用超声雾化吸入给药，将大鼠置于自制雾化吸入箱内，预先将雾气充满，在将大鼠置于箱内，持续雾化1 h，每天1次。各组根据相应给药方式连续给药6 d。

1.3.3 样品采集及处理

大鼠末次给药4 h后，给予过量戊巴比妥钠腹腔注射麻醉处死大鼠，迅速取出大脑，冰生理盐水洗净血液，冰盘迅速分离下丘脑，取一部分下丘脑组织，用预冷的PBS冲洗组织，去除组织残留血液，称重而后将组织用剪刀剪碎，将剪碎的组织与对应体积的PBS加入玻璃匀浆器中（相应体积是根据1:9的重量体积比，即1 g的下丘脑组织样品对应9 mL的PBS），然后冰上充分研磨，最后将匀浆液置于低温离心机进行离心，设置参数为5000×g的离心力，离心10 min，离心后取上清液置于-80 ℃保存备用。取部分下丘脑组织投入到4%多聚甲醛液进行固定，备用用于HE染色。取一部分下丘脑组织置于-80 ℃保存备用。

1.3.4 5-HT、DA、NE、GABA、Glu含量检测

取已制备好的上清液，采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测5-HT、DA、NE、GABA、Glu含量，根据试剂盒说明书步骤操作。

1.3.5 GABAARα1、GABAARγ2和5-HT1A受体mRNA表达水平检测

取出下丘脑组织，运用RT-PCR法检测GABAARα1、GABAARγ2和5-HT1A受体mRNA表达情况。操作方法：（1）设计引物：根据GABAARα1、GABAARγ2、5-HT1A、β-actin核苷酸序列设计引物，由广州擎科生物科技有限公司合成。β-actin：F：ATATCGCTGCGCTGGTCGTC，R：AGGATGGCGTG AGGGAGAGC。GABAARα1：F：5'-AGACAAAACCA CCAGAACCC-3'，R：5'-TTGACGAATAAAAACATA AGCAC-3'；GABAARγ2：F：5'-CGTGGTTTGCTTACT CCCTA-3'，R：5'-TCCGACAATCCAATACTTTT-3；5-HT1A：F：5'-AAGGTGGAAAAGAAGGGAGC-3'，R：5'-AATAACTGGGTTGAGCAGGG-3'。（2）提取下丘脑总RNA，然后进行逆转录，最后进行PCR实验，PCR扩增条件：94 ℃预变性5 min，94 ℃变性30 s，50 ℃~60 ℃退火30 s，72 ℃延伸30~60 s/kb，由变性、退火、延伸经过35循环，最后72 ℃终延伸10 min。（3）电泳：取10 μL PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳。（4）定量分析：运用凝胶成像系统对所拍摄的照片进行密度扫描，以GABAARα1、GABAARγ2、5-HT1A对β-actin的光密度值的比值表示相应的相对量。

1.3.6 HE染色

取出已用4%多聚甲醛固定好的下丘脑组织，按以下步骤进行：（1）脱水透明。使用全自动脱水机进行组织脱水。设定程序要求：让组织按从低浓度到高浓度酒精的顺序进行梯度脱水，酒精浓度一般为75%、85%、95%、100%无水乙醇；浸泡时间：95%的酒精浸泡两次，浸泡第二次时间约12 h，其余浸泡时间约2 h。将脱水后的组织放入酒精和二甲苯溶液中浸泡，浸泡时间大约30 min。（2）浸蜡：将保温箱温度调到56 ℃，将组织置于已经融化的石蜡中，在放入溶蜡箱中保温，浸蜡40 min。（3）包埋：使用镊子将下丘脑组织块置于入包埋盒中，浸上石蜡，而后迅速转移至冷冻台上，使蜡块冷冻后，最后取出蜡块组织。（4）蜡块切片：使用切片机，将切片厚度调到3 μm，同时调节刀片角度(约5 °)，切出完整切片后，平摊于40 ℃温水的恒温水箱中。平摊约5~10 min，然后用载玻片轻轻捞起，置于摊平器上，最后放入恒温箱中60 ℃烘干过夜。（5）脱蜡、HE染色：这个过程使用全自动染色机，调节程序按以下参数进行设置：切片浸入二甲苯脱蜡30 min，而后行梯度乙醇，从高浓度到低浓度100%、95%、85%、75%，接着予水冲洗5 min，然后浸润苏木精30 min，水冲洗10 min，浸伊红5 s，再予水冲洗2 min，最后再行梯度乙醇，按低浓度到高浓度75%、85%、95%、100%，浸二甲苯Ⅰ、Ⅱ。（6）封片、烤片：在载玻片上滴石蜡中性树胶，小心谨慎盖上盖玻片进行封固，注意盖的时候需排空气泡。（7）显微镜下观察并拍片：运用Olympus显示微拍照一体机，对下丘脑组织进行形态学观察，对所需视野拍片，编号并保存。

显微镜下观察每组切片，细胞质明显淡染，尼氏体明显减少的神经元细胞为发生病理性改变的细胞，定义为阳性细胞，运用Image J 1.8软件对HE染色图片进行分析，人工计数同一高倍视野阳性细胞数量并进行统计学分析取已制备好的上清液，采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测5-HT、DA、NE、GABA、Glu含量，根据试剂盒说明书步骤操作。

1.4 统计学处理方法

采用SPSS 20.0软件对实验数据进行统计分析，计量资料符合正态分布的使用（¯x±s）进行统计描述，不符合正态分布则用M（P25，P75）描述；符合正态分布与方差齐性的多组资料采用单因素方差分析(One-way ANOVA)；不符合正态分布与方差齐性的多组计量资料比较采用秩合检验（Kruskal-Wallis），两两比较用Dunn-Bonferroni检验。p<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果与讨论

2.1 各组大鼠一般状态情况

PCPA是5-HT合成抑制剂，能高度选择作用于色氨酸羟化酶，通过抑制酶的活性抑制5-HT的合成，有学者研究指出在足量注射PCPA（350 mg/kg）每天1次，连续2 d后可较理想复制失眠大鼠模型，在注射后3 d睡眠觉醒百分比开始发生变化，6 d达到高峰，此时几乎可以造成完全失眠的状态，7 d睡眠便开始恢复，9 d时已恢复正常，但此时脑内5-HT仍处于较低水平[9]。本研究观察各组大鼠一般状态情况，正常组：白天安静多倦卧，夜晚活动，性情温和，不易攻击同类，饮食基本正常，皮毛顺滑有光泽；模型组：造模后第1~3 d大鼠行为较活跃，表现出一定兴奋性，稍受声光等刺激就异常狂躁，同类相互攻击性增多，昼夜节律紊乱，皮毛较蓬松光泽少。造模后第4~6 d，大鼠疲劳状态，兴奋性降低，精神状态欠佳、活动减少，团缩，行走不稳，皮毛光泽进一步减退；挥发油高剂量组、挥发油低剂量组、醇提物高剂量组、醇提物低剂量组、地西泮组：给药1~3 d，白天活动减少，倦卧；给药4~6 d，白天活动进一步减少，倦卧，有睡意，能入睡，精神改善。水提物高剂量组、水提物低剂量组：实验过程中大鼠行为表现与模型组表现基本一致。从结果得知，模型组大鼠行为学表现与文献报道基本一致，给药干预后沉香挥发油、沉香醇提物可以改善大鼠失眠情况。

2.2 各组大鼠5-HT、DA、NE水平比较

脑干中缝核含5-HT神经元胞体，杨岑等[10]研究发现5-HT具有促进睡眠的作用，提示5-HT是调节睡眠的重要神经递质。DA主要存在于下丘脑与大脑黑质，脑内DA神经元兴奋则诱发睡眠觉醒，有学者研究发现失眠大鼠在治疗后比治疗前DA含量显著的降低[11]，提示若DA神经元兴奋性降低则睡眠可能增加，觉醒可能减少。NE能神经元胞体主要位于中脑网状结构、脑桥的蓝斑以及延髓网状结构的腹外侧部分，上行部分投射到大脑皮层、边缘前脑和下丘脑，有研究表明在抑制脑内酪氨酸羟化酶后，NE含量减少而睡眠时间相应增加[12]，提示NE含量减少时睡眠可能增加。本研究结果如表1、表2、表3所示。

表1 各组大鼠下丘脑中5-HT含量结果比较Table 1 Comparison of 5-HT contents in hypothalamus of rats in each group[M (P25, P75), n=10]

表2 各组大鼠下丘脑中DA含量结果比较Table 2 Comparison of DA contents in hypothalamus of rats in each group [M (P25, P75), n=10]

表3 各组大鼠下丘脑中NE含量结果比较Table 3 Comparison of NE contents in hypothalamus of rats in each group [M (P25, P75), n=10]

模型组大鼠5-HT含量为3.72 ng/mL，低于正常组，差异具有统计学意义（p<0.05）；模型组大鼠DA、NE含量分别为320.50 pg/mL、1.86 ng/mL，均高于正常组，差异具有统计学意义（p<0.05）。给药干预后，沉香挥发油高剂量组、沉香挥发油低剂量组、沉香醇提物高剂量组、沉香醇提物低剂量组，5-HT含量显著上升，DA、NE含量显著下降，挥发油高剂量组、挥发油低剂量组、醇提物高剂量组、醇提物低剂量组下丘脑5-HT含量分别为4.85 ng/mL、4.84 ng/mL、4.81 ng/mL、4.49 ng/mL，均高于模型组，差异具有统计学意义（p<0.05）；DA含量分别为277.96 pg/mL、269.11 pg/mL、277.34 pg/mL、275.00 pg/mL，NE含量分别为1.56 ng/mL、1.54 ng/mL、1.57 ng/mL，1.58 ng/mL，均显著低于模型组，差异具有统计学意义（p<0.05）。上述研究结果说明，沉香挥发油、沉香醇提物能够增加5-HT含量，降低DA、NE含量，对PCPA致失眠大鼠具有镇静催眠作用。

2.3 各组大鼠GABA、Glu水平比较

GABA和Glu为氨基酸类神经递质。GABA是中枢神经系统中较为广泛的神经递质，是重要的抑制性神经递质，具有镇静、催眠等功能。Glu广泛分布于脑内，对丘脑、大脑皮层、小脑的神经元起兴奋性作用。在缺乏有效睡眠时，Glu功能增强，GABA与Glu是脑内主要的抑制性与兴奋性神经递质，Glu在脑内多属中间代谢产物，只有少数发挥神经递质的作用，Glu是GABA合成的重要原料，而GABA本身不能通过血脑屏障，因此大脑中的GABA均由脑内Glu作为原料而生成，故实验中常以Glu与GABA的比值作为客观评价中枢神经系统功能兴奋和抑制状态的指标[13,14]。研究表明，GABA与Glu在不同脑区的含量及相应受体功能的改变参与睡眠-觉醒的过程，在睡眠调节中起着重要作用[15,16]。本研究结果如表4、表5、表6所示。

表4 各组大鼠下丘脑中GABA含量结果比较Table 4 Comparison of GABA contents in hypothalamus of rats in each group (x±s, n=10)

表5 各组大鼠下丘脑中Glu含量结果比较Table 5 Comparison of Glu contents in hypothalamus of rats in each group (x±s, n=10)

表6 各组大鼠下丘脑中Glu/GABA含量结果比较Table 6 Comparison of Glu/GABA contents in hypothalamus of rats in each group [M (P25, P75), n=10]

模型组大鼠GABA含量为1.16 ng/mL，低于正常组，差异具有统计学意义（p<0.05）；模型组大鼠Glu含量为9.85 pg/mL，高于正常组，差异具有统计学意义（p<0.05）；模型组大鼠Glu/GABA为8.51，高于正常组，差异具有统计学意义（p<0.05）。给药干预后，沉香挥发油高剂量组、沉香挥发油低剂量组、沉香醇提物高剂量组、沉香醇提物低剂量组，GABA含量显著上升，Glu含量显著下降，Glu/GABA显著降低，挥发油高剂量组、挥发油低剂量组、醇提物高剂量组、醇提物低剂量组GABA含量分别为1.46 ng/mL、1.44 ng/mL、1.41 ng/mL、1.39 ng/mL，高于模型组，差异具有统计学意义（p<0.05）；Glu含量分别为8.73 pg/mL、8.94 pg/mL、8.55 pg/mL、8.85 pg/mL，低于模型组，差异具有统计学意义（p<0.05）；Glu/GABA分别为6.00、6.31、6.09、6.37，低于模型组，差异具有统计学意义（p<0.05）。上述研究结果说明，沉香挥发油、沉香醇提物能够增加GABA含量，降低Glu含量，降低Glu/GABA，对PCPA致失眠大鼠具有镇静催眠作用。

2.4 各组大鼠GABAARα1、GABAARγ2和5-HT1A受体mRNA表达水平比较

Sookoian等[17]发现处于冬眠期的松鼠其大脑内5-HT1A受体的表达较非冬眠期增加，通过相应检测手段也显示5-HT1A受体mRNA在此时期是处于高表达水平。GABAA受体在成熟脑组织内含量较多，GABA能神经元效应的发挥多数是通过GABAA受体介导调控的，GABAA受体上含有GABA识别点、氯离子通道、苯二氮䓬识别点，因此当GABA与GABAA受体上的GABA识别点结合后，氯离子通道开放而使氯离子内流，氯离子内流引起膜电位改变使神经元去极化，从而发挥GABA的中枢性抑制作用，其中在成熟脑组织中GABAARα1、GABAARγ2是组合较多的亚型之一，有学者研究失眠动物GABAARα1、GABAARγ2、5-HT1A受体mRNA表达降低，使用抗失眠药物干预表达升高[18]。本研究结果如表7、表8、表9所示。

表7 各组大鼠下丘脑中GABAARα1 mRNA结果比较Table 7 Comparison of GABAARα1 mRNA contents in hypothalamus of rats in each group [M (P25, P75), n=10]

表8 各组大鼠下丘脑中GABAARγ2 mRNA结果比较Table 8 Comparison GABAARγ2 mRNA contents in hypothalamus of rats in each group [M (P25, P75), n=10]

表9 各组大鼠下丘脑中5-HT1A mRNA结果比较Table 9 Comparison 5-HT1A mRNA contents in hypothalamus of rats in each group [M (P25, P75), n=10]

模型组大鼠GABAARα1、GABAARγ2、5-HT1A受体mRNA相对表达量分别为0.55、0.35、0.46，均低于正常组，差异具有统计学意义（p<0.05）。给药干预后，沉香挥发油高剂量组、沉香挥发油低剂量组、沉香醇提物高剂量组，GABAARα1、GABAARγ2、5-HT1A受体mRNA表达显著升高，挥发油高剂量组、挥发油低剂量组、醇提物高剂量组GABAARα1mRNA相对表达量分别为0.94、0.84、0.85，GABAARγ2mRNA相对表达量分别为0.74、0.70、0.73，5-HT1A受体mRNA相对表达量为0.81、0.79、0.74，均高于模型组，差异具有统计学意义（p<0.05）。上述研究结果表明，沉香挥发油、沉香醇提物能够增加GABAARα1、GABAARγ2、5-HT1A受体mRNA表达，进一步证明对PCPA致失眠大鼠具有镇静催眠作用。

2.5 各组大鼠病理组织学观察

如图1所示，空白组大鼠下丘脑神经元细胞形态正常，结构完整，细胞界限清晰，细胞核居中，细胞质染色深，细胞质内尼氏体均匀分布；模型组可见神经元细胞核居中，细胞质染色淡，尼氏体比空白组减少；给药干预后，挥发油高剂量组、挥发油低剂量组、醇提物高剂量、醇提物低剂量组以及地西泮组神经元细胞形态正常，结构完整，细胞核居中，细胞质染色较深，尼氏体分布较均匀。水提物高剂量及低剂量组神经元细胞核尚无明显偏位，但细胞质染色淡，尼氏体减少。发油高剂量组；e：醇提物低剂量组；f：醇提物高剂量组；g：水提物低剂量组；h：水提物高剂量组；i：地西泮组。

图1 沉香提取物对PCPA致失眠大鼠下丘脑细胞形态学的影响（HE，×400）Fig.1 Effect of agarwood extract on morphology of hypothalamus cells in rats with insomnia caused by PCPA (HE,×400)

对各组阳性细胞进行细胞计数并进行统计分析，如表10所示，模型组大鼠下丘脑阳性细胞数均值为48.30，高于空白组，差异具有显著性（p<0.05）；给药干预后沉香挥发油高剂量组、沉香挥发油低剂量组、醇提物高剂量组、醇提物低剂量组阳性细胞数显著降低，挥发油高剂量组、挥发油低剂量组、醇提物高剂量组、醇提物低剂量组阳性细胞数均值分别为12.00、18.00、15.50、23.20，均低于模型组，差异具有显著性（p<0.05）。结合上述实验研究结果，使用沉香挥发油、醇提物对PCPA致失眠大鼠进行干预，出现5-HT、GABA含量升高，Glu、DA、NE含量降低，Glu/GABA降低，GABAARα1、GABAARγ2、5-HT1A受体mRNA表达增加，说明沉香挥发油、醇提物具有镇静催眠活性。段宙位等[19]研究沉香茶脱涩方法，制作复合型沉香茶饮料，口感更佳，营养更丰富；韩卫娟[20]通过实验研究表明沉香茶具有保护DNA氧化损伤活性；陈地灵等[21]研究发现沉香茶具有抗氧化、降血脂，可作为保健类茶饮。因此沉香在应用上除熏香安神外，同时可作为养生保健茶饮，可制作为养身保健茶，成为家庭养生保健的一个重要方法，为沉香产品进一步开发应用提供新的途径。

表10 各组大鼠下丘脑中阳性细胞数结果比较Table 10 Comparison of positive cell mass results in the hypothalamus of each group of rats (x±s, n=10)

3 结论

对PCPA所致失眠大鼠，沉香挥发油、醇提物使大鼠5-HT、GABA含量升高，DA、NE、Glu含量降低，以及增加GABAARα1、GABAARγ2、5-HT1A受体mRNA表达，改善失眠大鼠睡眠情况，具有镇静催眠的作用，对失眠的治疗具有一定作用。由此初步筛选对失眠具有治疗作用的沉香提取物，并推断沉香挥发油、醇提取物对单胺类、氨基酸类神经递质具有调节作用。从神经递质含量变化推断在一定范围内，对睡眠的作用程度与沉香挥发油、醇提取物的浓度呈正相关，沉香水提物对睡眠无明显作用。沉香挥发油可通过吸入的方式给药，从给药方式的简便性、满足家庭性用药需求的角度，沉香挥发油的作用更优，更有利于临床的应用与日常保健的推广，有望为治疗失眠提供新颖、有效、简便的治疗方式。