高小龙，仝丽娜，郭承意，周 雷，杨峻鹏，张 诚，李增魁，文 英，李 英

(青海大学农牧学院，西宁 810000)

新城疫（Newcastle disease，ND）是除禽流感外危害养禽业最重要的一种传染病，给养禽业造成了巨大的经济损失[1]。引起ND 的病原是新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV），NDV 病毒在分类上属于负链RNA 目（Mononegavirales）、副黏病毒科（Paramyxoviridae）、副黏病毒亚科（Paramyxovirinae）、禽腮腺炎病毒属（Avulavirus）[2]。NDV基因组为单股负链不分阶段RNA，基因结构为3′-NP-P-M-F-HN-L-5′，依次编码核衣壳蛋白（nucleo-capsid protein，NP）、磷蛋白（phosphor protein，P）、基质蛋白（matrix protein，M）、融合蛋白（fusion protein，F）、血凝素-神经氨酸酶蛋白（heamagglutinin-neuraminidase protein，HN）和大分子蛋白（large protein，L）等6 种结构蛋白。除此之外，P 基因通过RNA 基因编辑，在mRNA 的484 位插入1 个或2 个G 还可编码额外的2 个非结构蛋白，即V 和W 蛋白[3]。与其他副黏病毒科病毒一样，NDV V 蛋白与NDV 病毒拮抗宿主干扰素有关，突变或缺失V 蛋白会使病毒的复制能力和毒力受到严重影响，甚至丧失感染宿主细胞的能力[4-6]。V 蛋白由239 个氨基酸构成，其中N 端135 个氨基酸和P 蛋白N 端相同，C 端的氨基酸则不同，但不同毒株V 蛋白C 端（C-termimal domain, CTD）均存在高度保守锌指结构，且V 蛋白发挥拮抗宿主干扰素功能的主要主要取决于CTD 区[7]。因此，探究V 蛋白CTD 区的功能在揭示V 蛋白功能上具有重要意义，但由于V 蛋白N 端和P 蛋白N 端相同，研究V蛋白功能的一个难点就是缺少能和V 蛋白反应的特异性抗体。

纳米抗体（Nanobodies，Nbs）衍生于骆驼体内天然存在的重链抗体，是目前天然存在的最小抗体片段。具有分子量小、亲和力高、稳定性强、易制备且可识别常规单克隆抗体不易识别的表位等优点，是蛋白质功能研究的重要工具[8]。为从前期构建的纳米抗体酵母双杂交非免疫文库[9]中筛选V 蛋白CTD 区纳米抗体，本研究构建了V 蛋白CTD 区诱饵质粒，并评价了诱饵质粒的自激活能力和毒性，为V 蛋白特异性纳米抗体筛选奠定基础。……