李海霞，谢久凤，孙金花

（河南农业大学，河南 郑州 450002）

玉米为重要的粮饲兼用作物，在国民经济中占有重要地位。利用分子生物学手段培育玉米新品种，对扩大玉米种植面积、提高玉米产量具有重要意义，因此，转基因玉米研究也越来越受到重视。通过转基因技术培育具有抗病、抗虫、抗逆、抗除草剂、高产、优质等优良性状的转基因玉米品种已经成为世界各国育种研究的主要任务[1]。1986年Fromm等[2]用电击法将抗除草剂基因pat转入玉米原生质体中，获得了转化细胞；1988年Rhodes等[3]用电击法获得了转基因玉米植株，为玉米转基因研究翻开了新篇章。从首例玉米转基因报道以来，人们不断优化玉米转基因体系，尽管转基因的方法多种多样，但多年实践表明，农杆菌介导的遗传转化以其独特的优点一直受到育种家和分子生物学家的重视。玉米幼胚是目前基因工程使用较多的外植体，已有报道将新鲜的幼胚（IE）或由幼胚[4，5]诱导形成的I型[6]和II型[7]愈伤组织作为玉米转基因的受体材料。

以玉米杂交种昌7-2×HiⅡA和郑22×87-1的幼胚诱导、继代筛选出的良好Ⅱ型胚性愈伤组织为材料，用农杆菌（LBA4404）介导法进行转化，利用携带的GUS报告基因的表达载体p3301对转化过程中抗菌素的抑制效果、农杆菌的侵染时间、共培养的处理方法等条件进行优化，旨为高效玉米转化体系建立提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

转化受体材料为郑22×87-1、昌7-2×HiⅡA的幼胚诱导后进行1次继代培养的胚性愈伤组织。

农杆菌菌株为LBA4404，携带双元质粒载体pCAMBIA3301，由河南农业大学小麦育种研究室提供，质粒Cre-Loxp和BJ40由河南农业大学作物遗传育种实验室保存。……