艾孜买提·肉孜江 单玮碧 郭 海 姚巧玲

1.新疆医科大学基础医学院生理学教研室，新疆乌鲁木齐 830011；2.新疆医科大学第一附属医院麻醉科，新疆乌鲁木齐 830011；3.新疆医科大学第一附属医院皮肤科，新疆乌鲁木齐 830011

肥胖症是指各种疾病引起的能量摄入超过能量消耗导致体重、体脂含量增加的代谢性疾病，会增加多种疾病的患病风险[1-5]。缺氧诱导因子（hypoxia inducible factor，HIF）是细胞在缺氧状态下稳定表达，并参与各种适应性反应的一种核转录因子[6-8]，下丘脑弓状核或促黑素（pro-opiomelanocortin，POMC）神经元中的HIF 可能在高脂饲料喂养下或老年状态下参与小鼠食欲及体重的平衡调节[9-11]。HIF 对体重调控是否仅在高脂饲料或老年状态下存在，目前尚不清楚。

因此，本研究拟敲除缺氧诱导因子1α（hypoxia inducible factor 1α，HIF1α）flox/flox小鼠下丘脑内侧基底部（mediobasal hypothalamus，MBH）神经元中的HIF1α，探究MBH 神经元中HIF1α 在小鼠体重和糖代谢中所起的作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物和整体设计

选用30 只HIF1αflox/flox雄鼠（实验动物生产许可证号：SYXK（新）2018-0002），周龄6～8 周，体重23 g左右。将体重相近的两只小鼠随机分在两组，两组小鼠平均体重相差不大于2 g，每组15 只。均在注射后第5 天起每天19:30 称量体重和进食量。

1.2 病毒注射

实验组小鼠MBH 注射cre 腺相关病毒AAVhSyn-cre-GFP，选择性敲除MBH 神经元中的HIF1α；对照组小鼠注射AAV-hSyn-GFP。两组注射部位均为下丘脑内侧基底部神经元[前囟-1.5，中线±0.5（两侧），背腹5.8（颅骨表面）]。注射浓度均为1.45E+13 v.g./mL的病毒0.5 μL（上海吉凯基因，GCPV0181762）。

1.3 制作冰冻切片观察病毒注射的位置及表达情况

病毒注射28 d 后，每组随机选取3 只小鼠经心脏灌注4%多聚甲醛5 min 后取脑组织，分别在4%多聚甲醛和20%的蔗糖溶液4℃中放置24 h，用2-Methylbutane速冻（SIGMA-ALDRICH STBH3448）并存于-80℃。……