基于iTRAQ 技术的肝癌细胞蛋白质组学研究

2021-06-26关媛月高玉雪陈德喜王延军

中国医药导报 2021年15期

关媛月高玉雪庄园陈德喜王延军

首都医科大学附属北京佑安医院北京市肝病研究所，北京 100069

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）是一种以体液和血液传播为主的嗜肝DNA 病毒[1]，HBV 持续感染所致的肝癌是影响全球的一个重大健康问题，全世界至少超过3.5 亿是慢性HBV 的感染者[2]，每年有约887 000 人死于HBV 相关的肝病。尽管已证实核苷（核苷酸）类似物（NAs）和聚乙二醇化干扰素-α（Peg-IFNα）可有效抑制HBV 复制，但NAs 需要长期服用，α 干扰素（IFNα）治疗则易产生各种副作用，且这两种药物均难以根除HBV，实现慢乙肝的临床治愈[3]。因此，研究HBV 感染相关特异性蛋白标志物，寻找新的药物治疗靶点，对于临床具有重要的意义和价值。本研究使用同位素标记相对和绝对定量（isotope tagging for relative and absolute protein quantitation，iTRAQ）技术对稳定表达HBV 的HepG2.2.15 细胞株及其亲本HepG2 细胞株进行鉴定和定量分析，筛选出差异蛋白，通过生物信息学分析差异蛋白功能及相应通路，为进一步探讨HBV 致病的分子机制提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 细胞

HepG2 和HepG2.2.15 的肝癌细胞系于北京市肝病研究所保存。

1.2 主要仪器与试剂

高效液相色谱仪（Nano，HPLC）、Durashell-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm，EASY-Spray column）、质谱系统（Orbitrap Fusion）和蛋白定量染液（23238）购自美国Thermo 公司；超声波细胞破碎仪（XO）购自南京先欧仪器公司；硫脲（T7875）购自美国Sigma 公司；尿素（161-0731）购自美国Bio-Rad 公司；iTRAQ®试剂盒（4381664）和iTRAQ Reagent 8 Plex（4381663）购自美国AB Sciex 公司；DMEM 培养基（2003938）和胎牛血清（F8318）购自美国Sigma 公司。