王 宁，娜迪拉，李秋菊，尹明月

（新疆医科大学1第一附属医院干保中心综合内二科，2第七附属医院内分泌科，乌鲁木齐 830054）

血管病变与糖尿病并发症的发生密切相关，其中大血管疾病成为糖尿病的首要死亡原因。高血糖、胰岛素抵抗及与其相关的炎症、氧化应激等均与血管病变、特别是血管内皮功能异常密切相关。PPIA对应的蛋白质为亲环蛋白A(cyclophilin A,Cy⁃PA)，CyPA是近年广受关注的与血管疾病相关的蛋白，近期研究显示，CyPA/CD147信号通路与多种心血管疾病以及糖尿病密切相关[1-2]，目前认为的机制包括CyPA参与血管壁炎症反应，而且与血管壁氧化应激反应密切相关。近期研究发现，CyPA同时还是一类新型RNA结合蛋白（RNA binding protein，RBP）。而CyPA是否作为RBP对血管内皮细胞产生影响仍不明确，特别是对长链非编码RNA（lncRNA）表达的影响，有待研究。

1 材料与方法

1.1 材料采用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)（Scien⁃cell公司）为研究对象进行试验。使用试剂：ECM（Sciencell公司）、胎牛血清（Gibco公司）、0.25%胰酶（Gibco公司）、DMSO（MP公司）。晶芯®生物芯片ln⁃cRNA通用标记试剂盒。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养 将细胞复苏置入含20%胎牛血清的DMEM培养基中，培养于37℃，5%CO2饱和湿度条件下，实验所用的细胞均处于对数生长期。进行细胞分组，分为过表达3个组（实验组）、对照组3个组。对照组继续常规细胞培养，实验组进行PPIA过表达转染。

1.2.2 采用慢病毒转染实现细胞内PPIA的过表达采用慢病毒转染，构建NC病毒（病毒滴度1.35×109TU/mL）和包含PPIA的病毒（病毒滴度2.23×109TU/mL）。转染后鉴定感染空载病毒的细胞样品MOI为18，感染PPIA病毒的细胞样品MOI为18。

1.2.3 采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）对差异表达lncRNAs进行验证 按Trizol试剂说明书提供的方法提取总RNA，测量RNA浓度及检测RNA质量，保证适宜浓度及A260/A280在1.8～2.0。……