闫静川，王洪涛，贾艳慧，白晓智，刘 洋，陈俏华

已有研究[1]显示，脂肪间干细胞（adipose derived stem cells,ADSCs）能够促进创面愈合与组织再生。ADSCs具有多项分化潜能，可转分化为多种修复细胞直接参与创面修复；另一方面，ADSCs可能通过旁分泌各种生长因子和免疫调节因子，调控创面炎症反应，促进角质形成细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞的增殖和迁移，从而加速创面的愈合[2]，但具体机制尚不清楚。血管的发生是一个包含多种修复细胞、细胞因子、生长因子以及机械力学、氧浓度等微环境因素参与的复杂过程，低氧环境诱导、机械牵张、血管内皮细胞生长因子（Vascular endothelial Growth Factor,VEGF）、血管紧张素Ⅰ（AngiotensinⅠ,AngⅠ）、炎性因子等均参与这一复杂过程[3]。血管内皮细胞作为主要效应细胞，增殖、迁移等生物学特性在血管发生中发挥关键作用[4]。我们体外培养人ADSCs并收集培养上清液，作为条件培养基，观察其对体外培养的人脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）生物学特性的影响，初步探讨ADSCs通过旁分泌促进血管发生的相关机制。

1 材料与方法

1.1 实验材料 游离脂肪组织由空军军医大学第一附属医院烧伤外科提供，为全厚皮肤移植手术中修剪下废弃的脂肪，经患者同意后自愿捐赠。HUVECs购自美国模式培养物库，DMEM培养基、胎牛血清、0.25%胰蛋白酶、0.02%EDTA购自美国GIBCO公司；Ⅰ型胶原酶、鼠抗人VEGF，AngⅠ抗体购自美国Sigma公司；Transwell小室购自美国Corning公司；兔抗鼠荧光标记二抗、兔抗鼠酶联标记二抗，β-actin多克隆抗体购自美国Abcam公司。倒置相差显微镜（Olympus公司，日本）；CO2培养箱、多功能酶标仪（Thermo公司，美国）。

1.2 ADSCs培养上清的收集 按照YAN LI[5]方法进行ADSCs的培养。……