颜凤霞， 王莲辉， 田 凡， 李 涛

(1.贵州省林业科学研究院， 贵阳 550005； 2.贵阳市林草资源监测中心， 贵阳 550003)

长瓣兜兰(Paphiopedilumdianthum)为兰科兜兰属植物，分布于贵州、云南和广西等省区，因其独特的外观和优雅的花型而具有较高的观赏价值[1]。长瓣兜兰还是中国少有的多花兜兰，常受育种工作者的青睐，将其作为亲本进行育种，但由于遭受人类毁灭性采挖，野生资源极少，已处于濒危状态[2]。

王莲辉等[1]对长瓣兜兰的研究仅限于其栽培、组织培养及无菌播种快速繁殖体系等研究，在分子生物学层面的研究未见报道。兜兰属植物花发育及开花的分子机制及相关基因的挖掘也鲜见报道。RNA-seq 技术是近年来兴起用于在分子层面研究动物、植物、微生物的新技术[3-6]，该技术已应用于兰科植物多方面的研究。如在拟兰属中，Lin等[7]通过对其进行基因组测序，研究了其进化关系。Li等[8]通过转录组测序对扇叶文心兰中MADS-box家族基因进行分析。近年来已有两个兜兰品种通过转录组测序，开发出了SSR分子标记[9]。为了丰富兜兰分子生物学研究数据，挖掘与兜兰属花发育的相关基因。本研究利用RNA-seq 技术，对长瓣兜兰两个不同发育时期的花进行了转录组测序和分析，以期为解析长瓣兜兰花发育及开花的调控机制、培育优良兜兰品种奠定基础，并为其基因组测序组装提供参考。

1 材料与方法

1.1 实验材料

本研究以种植于贵州省林业科学研究院兰花资源圃中生长健壮的长瓣兜兰为实验材料， 7月和8月采集其花蕾和盛开花朵，每个样品三个生物学重复。……