王显峰，白萨日娜

(1.扎兰屯职业学院，内蒙古 扎兰屯 162650 ； 2.内蒙古医科大学基础医学院，内蒙古 呼和浩特 010110)

急性肺损伤(Acute lung injury，ALI)是指各种直接或间接因素所致的肺泡上皮细胞及毛细血管内皮细胞损伤，大量蛋白液积聚造成急性肺水肿，导致严重的急性呼吸衰竭，影像学表现是两肺渗出性病变，氧合指数<300[1]。急性肺炎是肺炎、败血症、创伤等引起的肺部炎症之一，在ALI中，中性粒细胞是炎症和发病机理的主要参与者，因此，当肺脏发生炎性病变时，外周血中大量的白细胞，尤其是中性粒细胞会聚集在患病部位，在肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid，BALF)和病理组织样本中有大量的多形核中性粒细胞，而外周血中的中性粒细胞(Polymorphonuclear，PMN)减少[2]。国内外研究人员一般采用气管滴入或腹腔注射脂多糖制造小鼠急性肺损伤模型[3-4]，本试验采用了对小鼠创伤较小的滴鼻方式，系统地比较了不同时间、不同脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)浓度的最适造模条件。

1 材料与方法

1.1 实验动物 本试验选用清洁级昆明小鼠，雄性，48只，6～8周龄，18～22 g，由内蒙古大学国家清洁级实验动物繁育室提供。

1.2 试验分组与设计 小鼠试验前禁食12 h，自由饮水。将小鼠随机分成8组，每组6只，分别为造模剂量组、造模时间组和空白对照组(Control)。造模剂量组每只小鼠滴鼻剂量分别为1、2 mg/(kg·bw)和5 mg/(kg·bw)的脂多糖，滴鼻6 h后取样。造模时间组分别于滴鼻后6、12、24 h和48 h进行取样，给药剂量均为2 mg/(kg·bw)。空白对照组小鼠滴鼻等体积0.9%NaCl。试验分别取每组每只小鼠肺灌洗液用来检测TNF-α、IL-6、IL-1β含量，取小鼠外周血镜下计算中性粒细胞数量，取左肺计算湿干重比，取右肺做病理切片。

1.3 试验材料 脂多糖LPS(46M4045V)，购自美国Sigma公司；IL-1β、TNF-α、IL-6 ELISA检测试剂盒，均购自美国eBioscience公司；酶标板，购自美国康宁有限公司；苏木素-伊红染液及其他试剂，均购自南京建成生物科技有限公司。

1.4 肺组织切片及苏木精-伊红染色 取部分小鼠右肺组织，置入4%多聚甲醛磷酸盐缓冲液固定12 h，常规石蜡包埋，连续切片，以中性树胶封片。

1.5 肺湿干重比计算 取完整小鼠左肺，用滤纸吸取肺组织表面的血液，干燥称量纸上称得湿重(W)，置72 ℃恒温箱，烘烤48 h后称量干重(D)，以湿干重比(W/D)表示肺组织含水量。……