朱 萌，张 宁，陶 伟

腹膜转移是进展期胃癌最常见的转移方式。关于腹膜转移，目前推测胃癌细胞、腹膜屏障之间的沟通与“对话”是形成移植瘤的关键，而在此之间起着传递“对话”作用的外泌体可能具有非常重要的作用。外泌体是一种细胞外物质，由肿瘤细胞分泌的外泌体称为肿瘤源性外泌体(tumor-derived exosomes, TDEs)，在其生成和释放过程中可以携带原发肿瘤重要信息物质miRNA，随外泌体以旁分泌的方式扩散到周围细胞或环境中，或经循环系统运输至远隔器官，目的性地调整受体细胞的信号转导，参与并促进癌组织的侵袭、转移[1-2]。然而，外泌体是否参与胃癌的腹膜转移，外泌体在其中发挥的作用及机制，尚未有统一认识。腹膜是癌细胞种植的场所，但癌细胞如何改造或调整以使其适宜于自身的种植尚有待于阐明。随着外泌体研究不断深入，证实胃癌细胞分泌的TDEs高表达miR-106a，TDEs搭载miR-106a进入腹腔，在miR-106a与靶标的作用下引发腹膜屏障损坏，腹膜间皮细胞形态与功能发生改变，有可能参与腹膜转移的过程[3]。本实验基于以上理论，拟在分子水平探讨TDEs-miR-106a-Smad7参与胃癌腹膜转移的可能机制。

1 材料与方法

1.1 主要材料、设备细胞培养：RPMI-1640培养基(Hyclone公司)，胎牛血清(Gibco公司)，青链霉素，胰蛋白酶(Genview公司)。转染：Lipofectamin 2000(Invitrogen公司)，hsa-miR-106a mimic(Genepharma公司)。试剂盒：外泌体提取试剂盒(Invitrogen公司)，EdU检测试剂盒(Ribobio公司)。其它试剂：Transwell小室(Costor公司)，GW788388 Hydrate(Sigma公司)，Recombinant Human TGF-β Protein(Sigma公司)。Western blot抗体：Smad7兔多克隆抗体(Proteinteck公司)，SMA兔多克隆抗体(SAB公司)，Fibronectin兔多克隆抗体(Abcam公司)，E-cadherin、N-cadherin兔多克隆抗体(Immunoway公司)。

1.2 外泌体提取培养高转移能力人胃癌细胞系AGS，无血清培养基处理2天后，吸取细胞上清液置于离心管内，2 000 r/min离心20 min，采用微孔滤膜过滤，按1 ∶2比例加入外泌体提取试剂至细胞上清液中，颠倒混匀；……