付强 郭妍婷 杨莉 史慧君

（新疆农业大学动物医学学院 830052)

牛病毒性腹泻病毒（Bovine Viral Diarrhea Virus,BVDV）属于黄病毒科（Flaviviridae）、瘟病毒属（Pestivirus），主要感染牛、羊、骆驼等家畜和野生动物[1]，是牛病毒性腹泻-黏膜病（Bovine Viral Diarrhea-Mucosal Disease,BVD-MD）的主要病原之一[2]。该病毒感染成年动物后常呈现隐性感染，一般不表现明显的临床症状，而幼畜感染后常造成腹泻、高烧、白细胞减少、黏膜糜烂甚至脱落等症状，感染孕畜后造成流产、产死胎和畸形胎、繁殖障碍等[3,4]。尤其是非致细胞病变型（Non-cytopathogenic Effect,NCP）BVDV 感染妊娠早期母畜，造成持续性感染（Persistent Infection,PI）犊牛的出现，PI 犊牛一旦再次感染CP 型BVDV 后表现出严重的腹泻黏膜病，最终因脱水和代谢性酸中毒等致死率高达90%，而且PI 犊牛始终向外排毒，成为污染整个牛群的重要传染源[5,6]。

BVDV 非结构p7 蛋白在病毒复制过程中起到重要的作用。有研究报道，非结构蛋白p7 翻译后折叠并加工成六聚体形式，转运至细胞膜上，组成离子孔道，所以p7 蛋白属于离子孔道蛋白家族，主要参与介导一些离子（Na+、Ca2+、K+、H+等）运输，而且对病毒进入细胞及子代病毒在细胞中成熟产生影响[7-9]。本研究开展BVDV 非结构蛋白p7 的基因克隆及原核表达纯化，以期获得p7 蛋白，为后续构建p7 的多克隆和单克隆抗体提供重要的材料和平台。

1 材料和方法

1.1 细菌、载体和cDNA

BL21（DE3）PLySs 大肠杆菌感受态细胞购自北京索莱宝科技有限公司；pCold-MBP 载体购自武汉淼灵生物科技有限公司；BVDV 毒株NADL 的cDNA 保存于新疆农业大学动物医学学院动物病毒实验室。

1.2 主要试剂和仪器

考马斯亮蓝快速染色液、透析袋和5×蛋白上样缓冲液购自北京索莱宝科技有限公司；……