刘双双，肖桂凤，洪晓黎，沈 逸

浙江大学医学院，浙江 杭州 310058

基础生物医学的研究主要集中在细胞、组织和模式生物中的复杂动态过程，这些过程发生在不同的时间和空间尺度范围内，其研究方向包括器官的发育和功能的变化、细胞内离子介导的信号传导、囊泡和蛋白质运输过程等。激光扫描共聚焦显微镜在解决这些问题方面起着举足轻重的作用[1,2]。通常采用的XY或XYZ扫描方式实现了高分辨生物结构的可视化，但是高分辨率主要指的是空间分辨率，时间分辨率仍然落后于许多生物动态过程的速度。

为了实现快速共聚焦显微成像，通常采用高速扫描装置[3](如共振振镜)或者多光束扫描装置(Nipkow Spinning disk)[4,5]，然而这些系统的灵敏度和分辨率较低，速度也只能达到每秒几百帧，仍然达不到高分辨快速成像的要求。激光扫描共聚焦显微镜的XT线扫描方式是对同一条线段重复扫描，检测一段时间里荧光信号的快速变化，XT线扫描方式能够达到每秒上千帧的扫描速度，解决了生命科学研究中追踪快速事件的难题。但有些品牌的共聚焦显微镜进行XT线扫描时，扫描方向无法识别。扫描方向不确定，则无法判断荧光信号的具体定位及快速移动信号的方向，限制了对诸多现象的深入研究。本研究建立了一套确定XT线扫描方向的实用方法，详细阐述了Zeiss、Nikon 和Olympus 共聚焦显微镜XT线扫描模式的具体操作方法及线扫描方向的差异。

1 制作荧光小球样品

以荧光笔制成荧光小球作为研究对象。……