周文峰 金朝红 梁琳珂

地中海贫血简称地贫,是一种遗传性疾病,由于珠蛋白基因突变或缺失导致珠蛋白肽链合成不足,使红细胞数量和血红蛋白浓度比例失衡,导致不同程度的贫血和轻重各异的临床表现［1］。α 珠蛋白链缺乏者称为α 地贫,β 珠蛋白链缺乏者称为β 地贫,同时还有α 和β 链都异常的复合型基因异常及特殊罕见类型的肽链基因缺陷等［2］。该疾病广泛分布于世界各大地区,在我国的两广地区、云贵川、东南沿海及湖南、湖北等地区多见,北方则少见［3］。目前除了输注红细胞,缺乏其他有效手段,国外有使用羟基脲调节肽链合成改善贫血的治疗方法,但疗效不明显［4］；造血干细胞移植是目前临床唯一治愈重型β 地贫的方法,但国内外尚无一致认可的临床指南或共识,无法广泛有效的开展［5］；基因治疗可以摆脱输血依赖,理论上可以根治地贫,这为地贫提供了新的有希望的治疗方向,但目前处于研究阶段［6］。因此通过合理的检查手段和方法进行地贫的筛查和确诊,发现潜在地贫基因异常患者,避免重型地贫婴儿的出生是控制该病的最经济有效的手段。本研究主要分析MCV、MCH 及EFT 结合地贫基因检测在地贫诊断中的价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2016 年9 月～2020 年9 月就诊本院的3956 例普通患者,将血常规指标MCV＜82 fl 或/和MCH＜27 pg 的患者纳入研究对象,行红细胞脆性试验,溶血百分率＜55%的患者为阳性,应用地贫基因检测进行确诊。最终将224 例地贫基因突变患者设为观察组,另将248 例地贫基因阴性患者设为对照组。

1.2 方法 血常规：使用希森美康XN2000 血细胞分析仪(希森美康XN 血球试剂)进行检验,MCV 正常参考值为82～100 fl,低值设置为82 fl,MCH 正常参考值为27～34 pg,低值设置为27 pg；对MCV＜82 fl 和(或)MCH＜27 pg 的患者行红细胞脆性试验。

红细胞脆性试验：采用直接比色法,使用仪器是日立7600 全自动生化分析仪,由广州科方生物技术股份有限公司提供的检测试剂,设置为溶血百分率＜55%为阳性。

地贫基因检测：采用深圳汇研科创Expure-20 核酸提取仪；珠海黑马HEMA9600 基因扩增仪；亚能(深圳)YN-H18 型全自动核酸分子杂交仪及地贫基因提取和检测试剂盒。α 地贫基因检测采用gap-PCR 法,非缺失型α 地贫基因突变检测和β 地贫基因检测采用PCR-反向点杂交法。

1.3 观察指标 比较观察组中α 地贫基因突变患者与对照组的MCV、MCH、EFT 水平；比较观察组中β 及αβ 地贫混合基因突变患者与对照组的MCV、MCH、EFT 水平；比较观察组和对照组在MCV、MCH、EFT 的单一检出率和三项联合检出率。

1.4 统计学方法 采用SPSS19.0 统计学软件处理数据。计量资料以均数±标准差()表示,采用t检验；计数资料以率(%)表示,采用χ2检验。P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 地贫基因突变患者和阴性对照组MCV、MCH、EFT 水平比较 血常规化验发现α 地贫、β 地贫及αβ 地贫混合患者的MCV、MCH、EFT 指标均低于对照组,差异均具有统计学意义(P＜0.05)。见表1,表2。

表1 α 地贫基因突变患者与对照组MCV、MCH、EFT 水平比较()

表1 α 地贫基因突变患者与对照组MCV、MCH、EFT 水平比较()

注：与对照组比较,aP＜0.05

表2 β 及αβ 地贫混合基因突变患者与对照组MCV、MCH、EFT 水平比较()

表2 β 及αβ 地贫混合基因突变患者与对照组MCV、MCH、EFT 水平比较()

注：与对照组比较,aP＜0.05

2.2 观察组和对照组MCV、MCH、EFT 的单一检出率和三项联合检出率比较 观察组MCV、MCH、EFT 单一检出率以及三项联合检出率分别为84.82%、82.59%、69.64%、91.52%,均高于对照组的18.15%、16.53%、15.32%、24.60%,差异具有统计学意义(P＜0.05)。见表3。

表3 观察组和对照组MCV、MCH、EFT 的单一检出率和三项联合检出率比较 ［n(%)］

3 讨论

我国南方地区地贫主要类型为α 地贫和β 地贫,发病率最高的是α 地贫,其次是β 地贫［7］。部分地贫基因携带者由于缺乏临床症状而难以发现,重度地贫患者给家庭带来难以承受的压力［8］。我国部分地区地贫的发病率相对较高,具有明显的地域分布规律,据报道,在广东地区人群中α 地贫基因突变率为4%～16%,β 地贫基因突变率约为1%～5%［9,10］。其中比例最高的α 地贫基因突变类型为SEA,最多见的β地贫基因突变类型为CD41-42(-TTCT),最常见的αβ混合型地贫基因突变为--SEA/CD41-42 类型［11,12］。地贫基因突变分布具有地域和人群的差异性,发现并研究这些差异性可为地贫的预防工作提供数据支持,也可为本地区的地贫诊断方式提供借鉴。

相关研究认为红细胞脆性试验是筛查地贫的常用方法,红细胞在低渗盐水溶液中发生膨胀破裂的特性叫红细胞脆性,脆性增高说明低渗盐水中红细胞更易破裂,对低渗溶液抵抗力减弱,反之为红细胞脆性减低,红细胞脆性减低是地贫患者的特点［13］。地贫患者的红细胞形态为小细胞低色素改变,其中MCV、MCH水平大多会同时减低,部分为一项水平减低。本研究发现血常规化验发现α 地贫、β 地贫及αβ 地贫混合患者的MCV、MCH、EFT 水平均低于对照组,差异均具有统计学意义(P＜0.05)。观察组MCV、MCH、EFT 单一检出率以及三项联合检出率均高于对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05)。

综上所述,地中海基因检测是确诊地贫的最佳试验,但由于价格较贵、检测时间较长、部分医院无实验室技术条件等因素限制了检测普及,所以MCV、MCH,联合红细胞脆性试验及地中海基因检测是合理且经济的检测手段,这为临床考虑为地贫的患者提供了极大的帮助,红细胞脆性试验是非常成熟的技术,临床上广泛用于贫血患者的疾病鉴别和筛查,地中海基因检测是先进、有效、精准的试验,为患者后续可能治疗提供非常重要的临床实验资料。本研究在地贫患者筛查和诊断过程中可以构建一个合理、高效、稳定、经济的实验确诊体系,可以为潜在的地贫患者及地中海基因携带者提供了新的选择。