江国斌，陈晓萍

（台州医院 乳腺甲状腺外科，浙江 台州318050）

乳腺癌是全球范围内常见的恶性肿瘤之一，是女性死亡的首要原因[1]。据全球癌症报告统计，2016年全球约25万人确诊为乳腺癌，占女性恶性肿瘤新发病例的29%左右[2]。近年来，乳腺癌在我国的发病率呈上升趋势，且逐渐年轻化，对我国女性生命安全造成严重威胁[3]。因此，探究乳腺癌的发生、发展机制，寻找新治疗靶点具有潜在价值。

长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）属于非编码RNA，长度＞200个核苷酸，与乳腺癌等多种肿瘤的发生、发展密切相关[4-5]。组织分化诱导非蛋白编码RNA（tissue differentiation inducing non-protein coding RNA,TINCR）属于非典型lncRNA，是体细胞组织分化及肿瘤发生、发展所需的关键lncRNA[6]。microRNA-544a（miR-544a）在肿瘤侵袭、转移中发挥重要作用[7]。F-box/FBXW7是一种经典的抑癌基因，介导多种重要癌蛋白的泛素化降解，其基因表达缺失会导致原癌基因激活[8]。目前，lncRNA TINCR对乳腺癌的影响尚缺少研究。本实验通过研究过表达lncRNA TINCR靶向miR-544a/FBXW7对人乳腺癌MCF7细胞增殖、侵袭等生物学行为的影响，为寻找乳腺癌新治疗新靶点提供参考。

1 材料与方法

1.1 主要试剂与仪器

1.1.1 主要试剂人乳腺癌MCF7细胞株、胎牛血清、DMEM培养基、蛋白提取试剂盒、BCA蛋白检测试剂盒、FBXW7抗体、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）抗体、基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2,MMP-2）抗体、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）抗体、β-actin抗体（货号：SCC-111011-1、S9030、90113、BC3640、PT0001、K004271P、K000323P、K001437M、K001435M、M1000170）购自上海恒斐生物科技有限公司，Lipofectamine 2000转染试剂（货号：11668030）购自美国Life Technologies公司，实时荧光定量聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRTPCR）试剂盒（货号：DEM202-50T）购自北京拜尔迪生物技术有限公司，CCK-8试剂、Annexin VFITC/PI凋亡试剂盒、羊抗兔IgG抗体（货号：QN1293-OIR、WK304、BTN131149）购自北京百奥莱博科技有限公司，MatrigelTM基质胶……