韩 立 芹

(安徽天正司法鉴定中心，安徽 合肥 230000)

1 案例介绍

1.1 简要案情

因救助需要，某救助管理站委托本中心对其父亲和孩子(女孩)是否存在血缘关系进行鉴定，采集孩子、某男(疑父)指尖血各一份，同时采集疑父口腔拭子一份。

1.2 DNA分型检验

采用GoldeneyeTM DNA身份鉴定系统20A人类荧光标记STR复合扩增检测试剂(基点认知技术有限公司)对D19S433、D5S818、D21S11、D18S51、D6S1043、D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、CSF1PO、Penta D、Amelogenin、vWA、D8S1179、TPOX、Penta E、TH01、D12S391、D2S1338、FGA基因座进行复合PCR扩增。

采用AGCU Expressmarker 22人类荧光标记STR复合扩增检测试剂(无锡中德美联生物技术有限公司)对疑父口腔拭子D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、Penta E、D2S441、TPOX、TH01、D2S1338、CSF1PO、Penta D、D10S1248、D19S433、vWA、D21S11、D18S51、D6S1043、Amelogenin、D8S1179、D5S818、D12S391、FGA基因座进行复合PCR扩增。

使用ABI3130遗传分析仪对扩增产物进行毛细管电泳和基因型分析。

1.3 检验结果

采用基点20A试剂盒检测孩子血样、疑父血样及口腔拭子STR基因分型(表1、图1)。采用中德美联EX22试剂盒检测疑父口腔拭子STR基因分型(表2、图2)。

表1 孩子血样、疑父血样及口腔拭子常染色体基因座基因分型结果

A:疑父血样 B:疑父口腔拭子 C:孩子血样

表2 疑父口腔拭子常染色体基因座基因分型结果

图2 疑父口腔拭子常染色体STR分型结果

2 讨 论

经问询本案排除骨髓移植、同卵双胞胎、经常接触化学试剂、近亲婚配、输血史和检材污染情况，采用GoldeneyeTM DNA身份鉴定系统20A人类荧光标记STR复合扩增检测试剂(基点认知技术有限公司)复合PCR扩增，经检测疑父血样和口腔拭子基因分型出现三等位基因，疑父血样、口腔拭子在D19S433、D21S11、D3S1358、TPOX、TH01、FGA 6个基因座上出现三等位基因，与AGCU Expressmarker 22人类荧光标记STR复合扩增检测试剂(无锡中德美联生物技术有限公司)检验结果一致，表明疑父在D19S433基因座的基因分型为“12，13,13.2”，在D21S11基因座的基因分型为“30,31,32.2”，在D3S1358基因座的基因分型为“15,16,18”，在TPOX基因座的基因分型为“8,11,12”，在TH01基因座的基因分型为“6,7,9”，在FGA基因座的基因分型为“22,23,24”。在D19S433、D21S11、D3S1358、Amelogenin、TPOX、TH01、D2S1338、FGA 8个基因座上的等位基因峰高不均衡(图1)。经分析，孩子的等位基因可从疑父基因型中找到来源，累积亲权指数大于10 000，支持疑父为孩子的生物学父亲。

正常人常染色体单个STR基因座的分型图谱中纯合子有1个峰，杂合子有2个峰，一般很少出现3个峰或多个峰，单个STR基因座出现3个峰，称为三带型。STR三等位基因第一次被报道是在1999年[1]，目前关于三带型的报道较多[2-4]。三带型形成机制尚不明确，主要有以下观点[2]：同源染色体不分离；同源染色体不等价交换；嵌合体；骨髓移植受体内有供体细胞；双胞胎在胚胎发育过程中出现血液交换；发生肿瘤等病变；非特异性扩增[5]。

亲子鉴定过程中三带型等位基因现象时有发生，首先应重复试验排除检材、试剂等污染问题，再采用多种类型检材以及其他扩增体系进行验证。如果条件允许，增加基因测序等检测手段，以确保鉴定结果的准确性。