刘小斌，彭阿柳，何念军，赵凯辉，刘 蕾，文一帆，金艺鹏*

(1.陕西佛坪国家级自然保护区管理局，陕西 汉中 723400；2.洋县林业工作站，陕西 洋县 723300；3.中国农业大学动物医学院，北京 海淀 100193)

犬瘟热是由犬瘟热病毒(Canine Distemper Virus,CDV)感染引起的一种急性高度接触性传染病，目前尚无治疗特效药物，犬感染后死亡率高达50%～80%[1]。我国已报道有大熊猫感染CDV并发病甚至死亡[2-5]。犬接种疫苗可以有效预防犬瘟热，目前市场上成熟的犬用疫苗产品很多，但尚无大熊猫用疫苗产品。我国大熊猫保护区多地处中西部山区，由于历史、地理因素的限制，保护区内仍有村民居住，村民散养家犬较多，且几乎不进行防疫。家犬食物匮乏、自由觅食，活动地区常与野生大熊猫活动地区重叠。2015年，金艺鹏等首次从患犬瘟热的大熊猫体内分离到CDV毒株并完成全基因组测序，与从犬及貉体上分离的毒株对比，已经证明三者毒株具有同源性，表明犬瘟热是犬科动物和大熊猫的共患疾病，存在由大熊猫栖息地附近犬科动物传染给野生大熊猫的风险，若犬瘟热呈大流行趋势，会对野生大熊猫种群构成巨大威胁。目前，对于大熊猫栖息地周围犬科动物CDV携带情况仍不了解，且理想情况下，如果对大熊猫保护区周围一定范围的犬类进行疫苗免疫，将在相当程度上减少大熊猫感染该病的风险。为此通过调查佛坪大熊猫保护区辖区范围内家养犬的分布情况及两次免疫前后犬瘟热病毒抗体水平，以评估保护区野生大熊猫受犬瘟热病毒感染的风险。

1 材料与方法

1.1 主要试剂

犬三联抗体试剂盒及“卫佳伍”犬四联活疫苗从市场有资质的企业采购。

1.2 主要仪器

F82手持GPS测量仪(北京某信息技术公司生产)。

1.3 研究对象

三官庙及大古坪辖区范围内的家养犬。

1.4 试验方法

1.4.1 Dot-ELISA检测CDV抗体水平 用“卫佳伍”对秦岭三官庙及大古坪地区的家养犬进行2次免疫。第一次免疫前和第二次免疫后，从每只犬前肢头静脉或后肢隐静脉采集血液样本约6 mL，就地使用犬三联抗体试剂盒，按照说明书操作检测CDV抗体水平。

1.4.2 绘制犬只地理信息分布图 记录第二次调查涉及的所有家犬的地理信息位置，初步选取哨兵犬并标出其活动范围，绘制地理信息分布图。

2 结果

2.1 Dot-ELISA检测CDV抗体水平

2.1.1 第一次免疫接种前犬只CDV抗体水平 第一次免疫接种前，采集并检测43只犬的43份血液样本，从检测结果和统计情况(表1)来看，第一次免疫接种前，未检测到抗体阴性的样本。如果认为抗体滴度≤3为抗体水平较低，则抗体水平较低的样本数占总数的46.5%，抗体滴度≥4的占53.5%。

表1 第一次免疫接种前43只犬的CDV抗体水平

2.1.2 第二次免疫接种后犬只CDV抗体水平 第二次免疫接种后，采集并检测61只犬的61份血液样本，检测结果和统计结果(表2、表3)显示，第二次免疫后，仅 6只犬的CDV抗体检测呈阴性，占总数的9.8%。若认为抗体滴度≥4为获得了良好的抗体水平，可见经过系统的疫苗接种程序之后，有77.0%犬已经达到了良好的抗体滴度水平。

表3 第二次免疫接种后61只犬的CDV抗体水平

表2 第二次免疫接种后犬只的CDV抗体水平

续表2

编号特征抗体水平(滴度)编号特征抗体水平(滴度)7麻色538黑麻色48黑色539黄白49白640麻色510麻色441哨兵511麻色442白色512麻色543白色513黑麻色544白色514黑麻色545黑麻色515黄白646黄白616麻色547麻色317哨兵548哨兵418白色449白色519白色450白色520白色451哨兵犬121白色552哨兵犬022白色553哨兵犬023黑色554黄524黑655白626白色556白027灰麻色557白228灰色658白色229黑色459白色130黄460黑麻色031麻色561黄白0

2.2 犬只地理分布

从佛坪保护区区内及周边社区犬只分布图(图1)可以看出，对佛坪保护区大熊猫构成犬瘟热病毒传播潜在风险的犬只主要集中在4个区域，即这4个区域是监控和防疫的重点。

图1 61只家犬地理信息分布图及哨兵犬活动范围

3 结论与讨论

3.1 风险分析

第一次调查采集到的43份样本均没有检测到抗体阴性的样本，可能是该地一直以来都存在自然感染CDV后未表现明显症状或是感染后症状轻微未被犬主注意到的患犬，CDV的长期存在是大熊猫感染该病的风险之一。统计结果中46.5%的家养犬抗体水平较低，不能很好抵抗CDV感染，极大增加了感染后向外排毒的风险。从结果可见，保护区周围家养犬对CDV的抗病能力亟需增强，否则对于大熊猫健康是巨大的潜在风险。

第二次统计结果显示，抗体检测为阴性的犬仅占9.8%，数量仍较少，家养犬携带的CDV仍对熊猫是一个巨大的风险。有77.0%达到了良好的抗体滴度水平，较之第一次调查的53.5%有较大提高，能很大程度降低传染病向保护区其他地区的蔓延风险，由此可见免疫接种行之有效。从地理信息分布图上看，犬与大熊猫活动范围有交集，哨兵动物基本可以覆盖村落周围与保护区交界。

3.2 基于风险分析的疾病防控建议

根据调查统计结果，该病毒在佛坪保护区大熊猫活动范围周围的家养犬身上检出率较高，未免疫时抗体检测阴性率为零，可见其对保护区内大熊猫构成巨大健康风险，需要引起重视。根据检测调查结果分析，可从以下三个方面对保护区进行监测与防控，以规避犬瘟热对大熊猫造成的伤害：

(1)哨兵犬及犬只规范化管理

从监测研究中可以发现，在群体免疫水平相对较高、能够抵挡传染病大范围爆发及设置分布适当哨兵犬的情况下，哨兵犬的抗体水平维持一个低水平状态。一旦开始有蔓延的趋势，被感染的低抗体滴度哨兵犬大概率会优先表现症状，并且抗体水平变化可以反映无症状感染的情况。该体系建立后，只需对哨兵犬进行持续监测与群体补免即可。另外，哨兵犬管理方面应杜绝随意添加与放置，以免引入传染病影响群体免疫。其余家犬，应限制其活动范围，规范管理，严格控制生育，避免群体无限增长。

(2)建立免疫隔离带

此方法主要与周边村落可能接触野生动物的家养犬疫苗接种相关。对家犬群进行系统化的疫苗接种，根据抗体水平定期进行补免，保持群体抗体水平维持在高水平。高水平抗体能有效抑制传染病感染后的病毒复制过程。同时，依据保护区地形和地理图黄线划分隔离界限。冬天大熊猫等野生动物多在低海拔地区活动，隔离界限的划分要参考野生动物活动行为模式，以和低海拔河道附近有一定距离为限制。需要注意严格管理家犬活动范围，避免越过保护界。

(3)强化与其他大熊猫保护区的信息交流

与同省或所有大熊猫保护区所在地区的动物医院联动，及时收集就医的犬瘟热病患信息，更好地预报预警保护区疫病的发生、流行和爆发。保护区犬瘟疫情往往滞后于城市宠物犬。结合宠物临床相关疾病蔓延情况可以及时制定防控策略，若发现宠物集中出现犬瘟热蔓延，保护区应及时采取相应措施进行早期预防。