李 聪，田培洁，张 宇，张德咏,，刘 勇,，张松柏, *

（1. 湖南大学研究生院隆平分院，湖南 长沙 410125；2. 湖南农业大学植物保护学院，湖南 长沙 410120；3. 湖南省农业科学院植物保护研究所，湖南 长沙 410125）

0 引言

【研究意义】烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus，TMV）属帚状病毒科（Vigaviridae）科烟草花叶病毒属 Tobamovirus病毒，可侵染36个科的400多种植物，每年给全世界农作物造成的经济损失估计1亿美元以上[1]。TMV的基因组为一条正义单链RNA，其基因组长度约6 400 bp，编码1个结构蛋白和2个非结构蛋白；其中TMV P183基因中，编码一个假定的P54基因[2]，其功能目前还鲜见报道。【前人研究进展】TMV基因组第一个核苷酸连有一个7Gppp的帽子结构，紧接着是一个含有69个核苷酸的非翻译前导序列，编码TMV复制所需的专一性复制酶。从启动子到第一个终止密码子可翻译为P126蛋白，P126蛋白的C端有类似于螺旋酶和甲基转移酶的基本结构[3]，其主要功能是参与TMV复制。然而仅有P126蛋白存在时，TMV不能完成复制，表明TMV还编码其他蛋白参与其基因组复制[2]。通读P126基因的终止密码子，可翻译为P183蛋白，P183蛋白具有RNA依赖的RNA聚合酶结构，在TMV侵染后20～30 min就能合成足量的该蛋白，参与TMV基因组RNA复制，而仅有P183蛋白存在时，TMV的复制效率非常低[2]。此外，在这个读通区域中有一个起始密码子和一个开放阅读框（ORF），编码了假定的P54蛋白，预测其功能与TMV的复制相关[4]，然而，P54蛋白的功能，尚无研究证实。【本研究切入点】为研究P54蛋白的功能，需要对P54蛋白进行原核表达并分离纯化，获得大量的P54蛋白。【拟解决的关键问题】研究表明，植物病毒编码的基因，在E coli中原核表达，通常以包涵体形式存在，包涵体蛋白的复性纯化是获得有活性纯化蛋白的技术难题[5]。……