LYZL6在正常男性和弱精子症患者精液精子中的表达①
2021-05-25张小悦蔡华戈曾繁飞杨伟忠
张小悦,蔡华戈,曾繁飞,杨伟忠
(惠州市第三人民医院泌尿外科, 广东 惠州 516000)
不孕不育症在临床上较为常见,会对人类的身心健康构成较大的危害。WHO相关调查数据显示,目前全球范围内育龄夫妇中,不孕不育症夫妇占到了其中的1/5,并且男、女因素约各占50%[1]。在不育症中,男性因素较为复杂,其诱发因素诸多,常见的如遗传、环境、感染、免疫等。近年来,随着生态环境污染的加重,人们生活方式的改变,男性精液质量不断下降,男性不育患者数量逐渐增加,极大地降低了人类的生育水平。相较于无精症、少精症引发的男性不育,弱精子症引起男性不育更为常见,占比最大[2]。 LYZL6(lysozyme-like 6)基因属于溶菌酶类似蛋白(Lysozyme-like proteins,LYZLs)中的一种,既往动物实验提示其在精子发生的过程中发挥重要作用,其可能与精子活力相关。因此,通过对LYZL6基因在正常男性及弱精子症患者精液精子的表达差异研究,可揭示LYZL6基因与精子活力的关系,可为弱精子症的诊治提供新的思路。为此,本研究纳入我院收治的36例弱精子症患者和15例精液健康男性进行分析,现报道如下。
1 资料与方法
1.1 实验试剂
RNA提取试剂盒All Prep DNA/RNA Mini Extraction kit(80204)购自 Qiagen。反转录试剂盒 Prime Script RT reagent Kit和荧光定量试剂盒SYBR Premix Ex TaqTM II 均购自 Takara。LYZL6一抗(PA5-44117) 购自Thermo Fisher,内参GAPDH一抗 (AF0006)购自碧云天,HRP-羊抗兔IgG 二抗(31460)购自Thermo Fisher。
1.2 精液标本收集
选取我院2019-06~2020-06男科门诊诊治的患者进行研究。收集精液,精液采用全自动计算机辅助精液分析系统(CASA)对精液进行常规分析。弱精子组纳入标准:(1)精液常规精液中的前向运动精子总数(PR)<32%,反复检测3次并确诊;(2)年龄≥22周岁,已婚;(3)精神和认知正常,可完成基本的交流和沟通;(4)临床资料完善、齐全。排除标准:(1)感染所致弱精子症者;(2)合并心肝肾等器官功能障碍者;(3)合并精索静脉曲张曲张等;(4)其它传染性疾病者。另纳入同期接受检查健康的正常生育男性精液样本作为研究对象,视为对照组,所纳入者均已婚已育。精液标本收集前均充分告知患者并取得患者的知情同意,并得到惠州市第三人民医院伦理委员会的批准。
1.3 Percoll法分离精液纯化精子
采用文献报道[3]的1层法梯度离心法分离精子,并显微镜下确认纯化效果,分离纯化后的精子经PBS溶液洗涤2次后离心,储存于-80 ℃冰箱。……
