翟思佳 尹时华 侯涛 任毅 廖行伟 黄巧 李念燊

耳蜗螺旋神经节神经元(spiral ganglion neuron,SGN)作为初级听觉神经元，是外周听觉信号传递到中枢神经系统的重要枢纽。SGN是水杨酸钠(sodium salicylate，SS)首要作用的主要靶点[1]。SGN损伤与听力损失息息相关，在水杨酸钠诱导耳鸣的发病机制中占据重要地位。

最新研究发现神经炎症是水杨酸钠诱导听觉损伤的新机制[2]，尽管已有研究证实水杨酸钠会导致耳蜗SGN细胞中多种炎症因子如肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-1(IL-1)上调[3-5]，但其确切分子机制仍缺乏进一步研究。而过度免疫所激活的NLRP3炎症小体可能是SGN细胞中炎症因子上调的关键原因，NOD-like receptor(NLR)样受体NLRP3作为模式识别受体，可识别各种危险信号，帮助炎症小体组装，促使半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase-1，CAPS-1)前体成熟并释放IL-1β、IL-18，间接促进TNF-α等炎症因子上调，加剧炎症反应，导致耳蜗内重要结构损伤[6]。目前已证实NLRP3炎症小体与老年性聋[7]、巨细胞病毒(CMV)感染诱发的感音神经性聋[8]和Mucklewell综合征[9](由NLRP3突变而引起其在SGN高表达)等多种听觉损害，以及阿尔兹海默病、帕金森病等神经退行性疾病[10]密切相关。

本研究旨在探讨NLRP3炎性小体激活在水杨酸钠诱导SGN损伤过程中的作用以及水杨酸钠诱导耳蜗炎症复合体激活的关键分子机制；并通过给予抑制NLRP3的预处理，观察其否可以减轻炎症因子的释放，减轻听觉系统损伤。

1 材料与方法

1.1主要试剂 人工外淋巴液(arfifical perilymph dluid,APL)，配制方法(单位：mM)：NaCl 137, KCl 5, CaCl22, NaH2PO41, Glucose 10, NaHCO312, MgCl21的溶液，pH 7.4±0.2；水杨酸钠购于sigma公司；MCC950购自selleck公司(S7809，500 μM)；NLRP3抗体购自NOVUS公司(NBP2-12446SS，1∶500倍稀释)；Caspase-1抗体购自Gene Tex公司(GTX123675,1∶100倍稀释)；……