郑在超，李 钫，杨 丰

(自然资源部第三海洋研究所、海洋生物遗传资源重点实验室，福建 厦门 361005)

在生物学和医学的研究中，细胞数量是一个常用的生理指标。例如，在人类疾病研究中，血细胞数量被用作贫血和炎症的指标[1]，血液循环中的肿瘤细胞数目[2]和浸润在组织中的肿瘤细胞数目[3]被作为癌症检测的重要指标。在微生物研究中，藻类[4]和细菌[5]的数量被作为环境监测指标。而在水产动物的研究中，循环血细胞数量是评估甲壳动物[6]、软体动物[7]、鱼类[8]等的免疫状态的指标。

细胞计数的常见方法有直接法和间接法。直接法即直接对细胞群进行计数，例如，血球计数板法是将细胞悬液滴在划有方格的玻璃上通过镜检计数[9]；连续稀释法是将菌液稀释涂布后对单菌落进行计数[10]；电子细胞计数仪是基于库尔特计数原理，在细胞通过充满电解质的测定管后，根据电阻的变化计算细胞直径，最后统计出给定大小的细胞数目[11]；流式细胞仪可以将单个细胞一一分开分别测定荧光值等指标并进行计数[12]。间接法中，可以根据菌液浊度估算细胞数量[9]；MTT法利用3-(4，5-二甲基-2-噻唑基)-2，5-二苯基四氮唑溴盐[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide，MTT]被活细胞中的琥珀酸脱氢酶氧化为蓝色的甲臜，再加入二甲基亚砜(DMSO)溶解并测定其光吸收值来估算活细胞数量[13]。虽然细胞计数的方法种类繁多，但是上述方法均不适合用于直接测定实体组织的细胞数。对于实体组织而言，通常需要利用胶原酶[14]、胰蛋白酶[15]，或纤维素酶[16]等将块状组织消化为单细胞悬液再进行计数，而这个方法也并不适用于所有实体组织，且操作繁琐，组织消化的充分程度直接影响准确性。……