骆辉，阴文奇，高露茜，王雪涛，罗旭，廖果，李书伟，周远成*

（1.四川省畜牧科学研究院，畜禽生物制品四川省重点实验室，动物遗传育种四川省重点实验室，四川成都 610066；2.畜科生物工程有限公司，四川省动物生物制品工程技术研究中心，四川成都 610200）

猪圆环病毒3 型（PCV3）是一种新型圆环病毒，2016 年首次在患有猪皮炎肾病综合征（PDNS）与繁殖障碍的母猪及其流产胎儿体内被鉴定发现［1］。基因分析发现PCV3与PCV2、PCV1基因组之间的同源性较低，并且抗原蛋白Cap 之间不具有交叉保护性［2］。相关研究表明，PCV3已经在我国出现并且流行了很长一段时间［3］。PCV3 常以混合感染的形式出现，给养猪业的疾病防控带来了一定困难，因此，快速准确地诊断猪群的感染状态对于预防和控制猪圆环病毒具有十分重要的意义。目前，实时荧光定量PCR检测技术以其简便快捷、灵敏度高、特异性强等特点在临床上得到广泛应用。本研究通过设计针对PCV3 ORF2 的特异性引物，探索引物和探针最佳工作浓度，进一步确定最适反应体系及扩增条件，期望应用荧光定量PCR技术建立定量检测PCV3的方法。

1 试验材料

1.1 主要试剂及仪器设备 试剂：2×Premix Ex TaqTM、DL2000 DNA Marker，均购自宝日医生物技术（北京）有限公司；病毒基因组DNA提取试剂盒，购自康宁生命科学（吴江）有限公司。仪器：NanoDrop 2000（微量分光光度计，ThermoFisher Scientific）；实时荧光定量PCR 仪（CFX Connect Real-Time system，BIO RAD）。

1.2 相关引物及探针 参照GenBank 中发表的PCV3 基因组序列，针对猪圆环病毒ORF2 保守区域，应用生物信息软件Primer Premier 5.0 分别设计一对特异性引物和一条标记FAM 荧光报告基团的TaqMan MGB 探针，并送生工生物工程（上海）有限公司合成。……