刘瑞芳,陈嘉轩,李艾欣,孙 喜,吕 立

(西北农林科技大学动物科技学院，陕西 杨凌 712100)

所谓细胞融合就是指在外力(诱导剂或促融剂)的作用下，2个或2个以上的异源细胞或原生质体相互接触，从而发生膜融合、胞质融合和核融合并形成杂种细胞的现象，又称细胞杂交。体外诱导细胞融合的方法有物理法、化学法和生物法。化学法是利用化学试剂如聚乙二醇、二甲基亚砜、脂质体等改变细胞膜脂质分子排列诱导细胞融合。PEG诱导细胞融合受很多因素的影响,如细胞密度、PEG相对分子质量、PEG的体积分数等。该试验以鸡红血细胞为材料,通过调整鸡红细胞保存液和pH,诣在提高细胞融合率，为PEG诱导细胞融合在本专科实验教学中的应用提供参考依据。

1 试验材料

1.1 试剂与仪器

1.1.1 试剂 GKN溶液、1%Hanks溶液、50% PEG溶液、抗凝剂、阿氏液(Alsver)、0.85%生理盐水、1%詹那斯绿B溶液。

1.1.2 试验仪器 分析天平(日本岛津有限公司)、低速离心机(湖南湘仪有限公司)、移液器(德国eppendorf有限公司)、恒温水浴锅(上海精宏实验设备有限公司)、光学显微镜(麦克奥迪实业集团有限公司)

2 试验方法

2.1 血细胞悬液的制备

2.1.1 使用Alsver液制备血细胞悬液 鸡翅下静脉采血，将采集的血液注入含有柠檬酸钠的Alsver液中，Alsver液与鸡血按1︰3～1︰4的比例稀释，制成鸡血红细胞储备液。取储备液1 mL，加入4 mL 0.85 %的生理盐水，混匀，1 500 rpm离心5 min, 弃上清液，重复上述操作一次。所得沉淀用4 mL GKN溶液1 000 rpm离心3 min, 弃上清液，再用GKN溶液稀释沉淀，制成血细胞悬液。

2.1.2 使用生理盐水制备血细胞悬液 在肝素钠抗凝采血管中用静脉采血针采血 2～4 mL，轻轻颠倒采血管使血液充分与肝素接触。……