（上海海关动植物与食品检验检疫技术中心，上海 200135）

狂犬病毒（rabies virus，RV）、伪狂犬病毒（pseudorabies virus，PRV）、犬 瘟 热 病 毒（canine distemper virus，CDV）、犬 细 小 病 毒（canine parvovirus，CPV）和犬冠状病毒（canine coronavirus，CCV）是5 种重要的犬科动物传染病病原，严重影响犬科动物的健康[1～6]。微流控芯片技术（microfluidic chip assay）是一种基于环等温扩增技术（loop mediated isothermal amplification，LAMP）的高通量快速核酸检测技术。它将不同病原特异性引物固化在同一块塑料芯片不同的微孔反应槽内；这些微孔反应槽与加样孔相连，通过离心把待检核酸样本均匀地甩入各微孔反应槽内；每块塑料芯片有8 个加样孔，每个加样孔与4 个微孔反应槽相连，故理论上在1 块芯片的8 个加样孔加入同一份待检核酸，可以实现32 种不同病原的同步检测[7]。与传统PCR 或者荧光PCR 的单病原检测相比，微流控检测技术使高通量同时筛查多重犬科动物疫病成为可能，但微流控检测的技术原理为LAMP，其检测的敏感性与LAMP 检测方法一致，介于PCR 和荧光PCR。

本研究在建立针对RV、PRV、CDV、CPV和CCV LAMP 检测方法的基础上，将这些单病原LAMP 检测体系固化于芯片微孔反应槽内，制备了5 种犬科动物病毒微流控检测芯片，并用不同的病毒样本及临床样本进行测试，确认了建立的微流控芯片检测方法的有效性和稳定性。

1 材料与方法

1.1 主要试剂和材料

TRIzol，购自Invitrogen 公司；Taq酶、AMV逆转录酶、RNA 酶抑制剂、dNTP、随机引物，购自Takara 公司；Bst DNA 聚合酶，购自美国NEB公 司；DNA 抽 提 试 剂 盒（QIAamp DNA Blood Mini Kits），购自QIAGEN 公司；微流控芯片及微流控检测仪，购自上海速芯生物科技有限公司。其他试剂，均购自国药集团上海化学试剂有限公司。

1.2 病毒样品来源及处理

RV、PRV、CDV、CPV 和CCV 等毒株和相关临床样本，由本单位保存备用；……