冯久芳 梅 芊

(1.商丘市食品药品检验检测中心 商丘 476000；2.河南省食品药品检验所 郑州 450018)

复方丹参丸由丹参、三七、冰片三味中药经提取精制而成，为黑色的浓缩丸，除去包衣后丸芯显棕黄色至棕褐色；气芳香，味微苦。复方丹参丸系国家药典收载的经典中成药方，具有活血化瘀、通络止痛、理气开窍的功效，用于心脉瘀阻、气血凝滞所致的冠心病、心绞痛之胸闷、心悸、心痛、气短、面色苍白、四肢厥冷、唇舌青紫黯红等症。据相关药理实验发现丹参酮类属于脂溶性成分，具有抗菌消炎、抗肿瘤等功效；而丹酚酸类属于水溶性成分，能够抑制大鼠脑、肝、肾的脂质过氧化；原儿茶醛能使冠脉流量增加。由于生产厂家不同，所生产的复方丹参颗粒的性状也有所差异，临床疗效相差甚远[1]。丹酚酸B是丹参水溶性成分中最主要的活性成分，在总酚酸类成分中含量最高,且活性最强[2]。现行质量标准中只有丹参酮ⅡA的含量测定方法，为加强本品内在质量控制，参考复方丹参片的药典标准，增加了用高效液相色谱法测定丹酚酸B的含量，本研究在原质量标准的基础上，增加了丹参中丹酚酸B的HPLC含量测定方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Antaris傅里叶变换近红外光谱仪；Agilent11100高效液相色谱仪(含G1311C四元泵、G1329B自动进样器、G1314F检测器、Chem32工作站)；BSA224S-CW电子分析天平(赛多利斯科学仪器(北京)有限公司)；9960D型超声波清洗仪(CBL科贝尔)。

1.2 试药

复方丹参丸(江苏康缘药业股份有限公司，规格：每袋装1g，批号120601、120602、130801、131001)；丹酚酸B对照品，购自中国食品药品检定研究院(批号为111562-201212)；乙腈(色谱纯，美国天地公司)；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

1.3 色谱条件

采用高效液相色谱法，WatersAcquityUPLCC18色谱柱，流动相为0.02%磷酸(A)和含0.02%磷酸的80%乙腈(B)，检测波长为203nm，柱温40℃，流速0.42ml·min-1。

1.4 溶液的制备

1.4.1对照品溶液的制备

精密称取置五氧化二磷减压干燥器干燥14h的丹酚酸B对照品适量，加稀乙醇制成每1ml含丹酚酸B为50μg的溶液，即得。

1.4.2供试品溶液的制备

取装量差异项下的内容物，研细(通过四号筛)，取约0.1g，精密称定，置50ml容量瓶中，加稀乙醇适量，超声处理(功率250W，频率50kHz)30min，放冷，加稀乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。

1.4.3阴性对照品溶液的制备

取缺丹参的其他各味中药按处方及制备工艺制成阴性供试样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

1.5 近红外光谱采集

将样品放入石英瓶内，利用积分球漫反射附件完成采集工作。吸光度数据格式设置为log1/R，采集光谱范围在4000～10000cm-1，扫描此时为16，分辨率设为8cm-1。每个样品分别采集3 张光谱，取其平均值用于数据处理。

1.6 HPLC分析

称取各对照品(丹参酮ⅡA 与原儿茶醛)1～2mg， 放入10mL量瓶内，加入适量蒸馏水溶解，摇匀，作为混合对照品溶液。采用HPLC法分析，利用外标法计算溶液浓度，再换算为复方丹参颗粒的质量含量。

2 结果

2.1 丹酚酸B回收率试验结果

取已知含量的样品9份，按1.4.2项下制备供试品溶液，进行测定，计算回收率，见表1。试验结果表明,丹酚酸B平均回收率为98.2%，RSD为1.2%。

表1 丹酚酸B回收率试验结果(n=9，mg)

2.2 样品测定

取4批样品，进行测定，见表2。

表2 样品测定结果(n=2)

3 讨论

丹酚酸B为水溶性的酚性酸化合物，是丹参水溶性成分中最主要的活性成分，其含量能在一定程度上反应复方丹参丸的质量[3]。复方丹参丸为江苏康缘药业股份有限公司生产品种，已上市销售多年。检测指标原标准中没有丹酚酸B含量检测。波长选择《中华人民共和国药典》2015年版一部中丹参药材项下“丹酚酸B”的检测波长为203nm,故参考203nm波长作为复方丹参丸“丹酚酸B”的检测波长[4]。本次实验建立了丹酚酸B含量测定方法并对提取的溶液、提取的时间进行了考察，根据实验结果确定了最佳提取溶剂为80%甲醇和最佳提取时间为超声30min。同时对色谱柱也进行比较，优选确定适宜色谱柱为安捷伦色谱柱WatersAcquityUPLCC18[5]。通过方法学考察，本实验采用“0.02%磷酸(A)和含0.02%磷酸的80%乙腈(B)为流动相，柱温为40℃，流速为每分钟0.42mL,检测波长203nm[6]，理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于4000”的方法其线性关系良好、加样回收率良好、精密度及重复性良好，新的方法操作简便，结果可靠，更具有质量把控性[7]。

通过本文研究可得出，丹酚酸B紫外吸收光谱相似度达到97%。最终确定提取方案为：50ml的稀乙醇，超声(250W，40Hz)提取30min。复方丹参丸现行质量标准中只有丹参酮ⅡA的含量测定方法，为加强本品内在质量控制，增加了用高效液相色谱法测定丹酚酸B的含量。本实验建立的方法操作简单、快速，结果准确、可靠，可作为复方丹参丸质量控制的依据。