马晓彬，吴岳恒，陈 景，林吉进

［1.华南理工大学医学院，广州 510006；2.广东省人民医院（广东省医学科学院）广东省心血管病研究所心内科，广州510080］

目前，心血管疾病是人类致死致残的主要原因之一，随着全球生态环境和人类生活方式的改变，以及在人口老龄化等因素的作用下，每年因心血管疾病死亡的人数逐渐增加。因此，如何增加心血管疾病药物治疗的安全性和有效性，是当下全球研究的热点之一。壳聚糖（chitosan，CS）是甲壳类动物外骨骼和真菌细胞壁中的结构元素几丁质脱乙酰后得到的，是一种可降解的多糖，由重复的D-葡萄糖胺和N-乙酰基-D-葡萄糖胺单元组成，通过1-4糖苷键连接［1-2］。CS具有毒性低、免疫原性低、生物相容性好的特点［1，3-5］，其作为一种安全传递质粒DNA、寡核苷酸和小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）等基因材料的载体，已成为人们日益关注的非病毒载体之一。CS游离骨架上的氨基使其带正电荷，很容易与带负电荷的siRNA通过静电相互作用形成聚电解质复合物［1-2］，并且可保证siRNA稳定不被降解。CS作为生物材料载体，已经在肿瘤［5-6］、肾脏［4，7］和心脏［2，8-9］等领域有广泛研究。本研究通过合成氮磷比为70∶1的CS/siRNA溶液，分析粒径分布和Zeta电位，验证其对1～3 d Sprague-Dawley（SD）大鼠原代心肌细胞活性的影响和转染效率，为今后CS/siRNA在心血管疾病动物模型的研究和临床心血管疾病药物治疗提供参考。

1 材料和方法

1.1 主要材料

1～3 d龄SD大鼠乳鼠由南方医科大学实验动物中心提供；0.25% 胰酶（Gibco，25200056）；DMEM/F12培养液（Hyclone，SH30023.01）；南美胎牛血清（Gibco，10270106）；CS（MW=50-190 KDa，Sigma-Aldrich，448869）；siRNA（吉玛基因）：阴性对照siRNA（forward 5′-UUCUCCGAACGUGUCAC⁃GUTT-3′，reverse 5′-ACGUGACACGUUCGGAGA⁃ATT-3′，NC-siRNA），cy5修饰阴性对照siRNA（for⁃ward 5′-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3′，re⁃verse 5′-ACGUGACACGUUCGGAGAATT-3′，cy5-NC-siRNA）；CCK8（凯基，KGA317）；……