范梦璐，田苗，赵永振，平继辉

(南京农业大学动物医学院，江苏 南京 210095)

H9N2亚型禽流感病毒(H9N2 subtype AIV)自1966年从北美的火鸡体内首次被分离以来，已在全世界范围内广泛传播。1994年，在我国广东省分离到第1株H9N2亚型AIV[1-2]。随着该亚型病毒的不断传播和进化，H9N2 AIV已在我国家禽中成为流行最为广泛的流感病毒亚型。虽然H9N2亚型AIV感染家禽后仅表现出较低的致病性，但与其他病原体混合感染时会导致严重发病，给家禽业造成重大的经济损失[3]。疫苗接种是我国防控H9N2 AIV采取的最普遍的手段，研究表明，AIV在疫苗选择压力下正在不断发生重组和变异[4-5]。HA和NA是流感病毒表面的2种糖蛋白，是决定病毒抗原性的重要基因，HA基因上某些氨基酸位点的改变与流感病毒变异和致病性密切相关[6-7]。

病毒的反向遗传技术，又被称为病毒拯救，是通过构建RNA病毒的感染性分子克隆，在DNA分子水平上对其进行体外操作并拯救出具有活性的病毒粒子，从而研究病毒基因结构与功能的方法[8]。Neumann等[9]在1999年建立了流感病毒的12质粒反向遗传系统，将病毒8种vRNA片段的cDNA克隆到人RNA聚合酶Ⅰ启动子和鼠RNA聚合酶终止子之间，在转染8个vRNA片段的质粒DNA同时，共转染聚合酶(PB2，PB1和PA)以及核蛋白NP的蛋白表达质粒，在4个蛋白表达质粒所形成的聚合酶驱动下，转录出8个病毒RNA片段，进而形成病毒的最小复制单位核糖核蛋白复合体(vRNPs)，随后包装出病毒粒子，因此流感病毒的“12质粒系统”具有很高的病毒拯救效率。

本研究从江苏省某养鸡场发……