吴许丹，吴月，陈艳，张锦，陈婧，胡家欢，龙云凤，姜焱*，周斌*

(1. 南京农业大学动物医学院，江苏 南京 210095;2. 南京海关动植物与食品检测中心，江苏 南京 210019)

猪瘟病毒(classical swine fever virus，CSFV)是黄病毒科(Flaviviridae)瘟病毒属(Pestivirus)的一种正链RNA病毒[1]。猪瘟一旦暴发，疫源地的养殖业及政府都苦不堪言，全球每年因猪瘟遭受的经济损失数以亿计[2]。CSFV基因组是由两端的非编码区和位于中央的开放式阅读框(open reading frame，ORF)组成[3]。该阅读框编码的多聚蛋白在蛋白酶的作用下被分解成4个结构蛋白(C、E0、E1和E2)和8个非结构蛋白(Npro、P7、NS2、NS3、NS4B、NS4A、NS5A和NS5B)[4]。E0蛋白又称为Erns蛋白，是CSFV的一种囊膜糖蛋白，由多聚蛋白上268位的Glu至494位的Ala之间的227个氨基酸构成，分子量大小为44～48 kDa[5-6]。E0蛋白存在大量的抗原表位，能在病毒感染机体后诱导产生特异的免疫应答反应。可利用E0蛋白的初级抗原表位进行鉴别诊断，特异性区分CSFV、牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus，BVDV)和边界病病毒(border disease virus，BDV)感染[7]。我国《国家中长期动物疫病防治规划(2012—2020)》中已经明确将猪瘟的净化列为重点任务。鉴于目前的猪瘟病毒兔化弱毒疫苗免疫猪群后不能开展血清学鉴别诊断，不少猪场已经开始采用新疆天康生物股份有限公司[8]或者武汉科前生物股份有限公司[9]生产的猪瘟病毒E2亚单位疫苗，免疫后可以引导猪群产生针对E2蛋白的抗体。但应用检测E2抗体的试剂盒无法区分猪群中是否存在野毒感染，因此可通过检测E0蛋白的抗体确定猪群中是否存在野毒感染。本研究根据石门株E0基因序列，设计1对特异性引物，通过RT-PCR扩增目的基因，插入原核表达载体pET-28a中，构建了pET-28a-E0原核表达质粒。……