倪珺，雷诗敏，罗丽平，谢国玉，刘序，芮荣

(南京农业大学动物医学院，江苏 南京 210095)

子宫疾病是危害犬类健康与繁殖性能的临床常见疾病，严重者甚至威胁生命。近年来，我国宠物行业发展迅速，宠物犬饲养数量不断增加，犬的健康日益受到宠物主人的重视。众所周知，大多数子宫病变均与激素失调和细菌感染有关，而母犬生殖生理特点使其更易受微生物感染，引发生殖系统疾病[1]，其中子宫蓄脓发病率较高、危害较大，不及时治疗可能引发母犬死亡，研究犬子宫内膜细胞的变化对阐明子宫疾病的发病机制具有重要意义。培养犬子宫内膜基质细胞，可为了解犬子宫内膜病变过程中基质细胞的生长代谢、相互作用和内分泌调控等提供有益的体外模型，国内有关犬子宫内膜细胞的分离培养鲜有报道。本试验旨在通过优化基质细胞的分离培养程序，以期提高犬子宫内膜基质细胞体外培养的纯度和成功率，为进一步探讨犬子宫内膜相关疾病的发病机制提供有价值的体外细胞模型。

1 材料与方法

1.1 子宫组织样本的来源

2018年9月至2019年12月从南京数家宠物医院采集2～8岁进行子宫卵巢摘除术的健康犬子宫，摘取的子宫样本立即放入4 ℃含双抗(100 IU/mL青霉素和100 μg/mL链霉素)生理盐水中，2 h内送达实验室进行分离培养操作。

1.2 主要试剂

DMEM/F12培养基、胎牛血清购自Gibco公司；Ⅰ型胶原酶、胰蛋白酶、台盼蓝均购自美国Sigma公司；100×青霉素-链霉素溶液购自Biosharp公司。鼠抗人波形蛋白(vimentin)抗体、鼠抗人细胞角蛋白(cytokeratin-18，CK-18)抗体购自北京Bioss公司。……