吴托雅 石金 郭继东 刘原园 逄宇 鲁洁 高飞

结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis，MTB)可通过免疫逃逸促进其自身胞内存活，导致疾病的迁延不愈[1-2]。因此，探究MTB与宿主细胞的关系，对于深入阐明其致病机制及宿主的抗结核免疫具有重要意义。微小RNA(microRNA，miRNA)是一种内源性非编码核糖核酸，通过与靶基因的调控区域结合，在转录后水平降解mRNA或抑制靶基因的翻译，作为基因表达的转录后阻遏物参与许多生理和病理反应[3-4]。最近的研究已经确立了miRNA在免疫调节中的新作用，包括调节免疫细胞的发育和分化、抗体的产生及先天免疫等过程[5-6]。miRNA的异常表达也与各种肿瘤疾病相关[7]。研究显示，microRNA-21-3p(简称“miR-21-3p”)对肿瘤耐药、组织损伤、甲型流感病毒复制等具有调控作用[8-13]。然而，miR-21-3p对MTB感染的调控机制研究目前尚未见报道。为此，笔者通过原代巨噬细胞及细胞模型探究miR-21-3p在宿主巨噬细胞内对抗MTB感染中的作用。

材料和方法

一、实验材料

1.材料来源：研究所用的细胞系THP-1和U937，以及MTB标准株H37Rv均来自北京市结核病胸部肿瘤研究所生物资源样本库。

2.培养基：分枝杆菌罗氏中性培养基(批号：2012081)购自珠海市银科医学工程股份有限公司；OADC增菌液(9017941)和7H10固体培养基(批号：0126928)购自美国BD公司；1640含酚红培养液(批号：29420003)购自美国Corning公司；胎牛血清(批号：2021472)购自美国Gibco公司。

3.试剂：细胞/细菌总RNA提取试剂盒(批号：R1061)购自广州东胜生物科技有限公司；miDETECT A Track miRNA qRT-PCR Starter Kit试剂盒(批号：T0909)、miR-21-3p上游引物(批号：00417)及U6上游引物(批号：R0529)均购自广州锐博生物技术有限公司；Hifair®Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix(批号：H0901211)及Hief®qPCR SYBR®Green Master Mix(No Rox)(批号：H9001130)购自上海翊圣生物科技有限公司；……