刘惠娜　李艳玲　曹旺　邓常清

〔摘要〕 目的 以凝血因子Ⅻ （coagulation factor Ⅻ， FⅫ）為靶点探讨药根碱抗血栓作用的机制。方法 通过Ledock软件将药根碱分子与内源性凝血途径接触激活阶段关键靶蛋白FⅫ、活化凝血因子FⅫ （actived coagulation factor Ⅻ， FⅫa）、凝血因子Ⅺ （coagulation factor Ⅺ， FⅪ）和活化凝血因子Ⅺ （actived coagulation factor Ⅺ， FⅪa）进行分子对接，以结合能低于-5 kcal/mol作为阈值判断药根碱与接触激活因子的结合活性;采用体外凝血实验法检测血浆活化部分凝血活酶时间（activated partial thromboplastin time， APTT）、血浆凝血酶原时间（plasma prothrombin time， PT）、凝血酶时间（plasma prothrombin time， TT）;乏因子血浆纠正试验检测FⅫ、FⅪ、凝血因子Ⅸ （coagulation factor Ⅸ， FⅨ）、凝血因子Ⅷ （coagulation factor Ⅷ， FⅧ）、凝血因子Ⅹ （coagulation factor Ⅹ， FⅩ）和凝血因子Ⅶ （coagulation factor Ⅶ， FⅦ）的活性的抑制作用;Western blot法检测药根碱对FⅫ蛋白激活的抑制作用。结果 （1）分子对接实验表明，药根碱与FⅫa、FⅪa结合能均低于-5 kcal/mol，结合活性良好。（2）体外实验中，0.2～0.8 mg/mL药根碱均可显著延长APTT （P<0.01），但不延长PT和TT （P>0.05）。（3）药根碱各剂量均显著降低FⅫ活性（P<0.01），药根碱高剂量（0.8 mg/mL）可降低FⅪ活性（P<0.05），但对FⅨ、FⅧ、FⅩ及FⅦ活性无显著影响（P>0.05）。（4）药根碱各剂量均显著抑制FⅫ蛋白的激活（P<0.01）。结论 药根碱与FⅫa对接较好，显著延长APTT，抑制FⅫ蛋白激活，降低血浆FⅫ活性，提示其抗栓作用可能通过抑制FⅫ的活性而发挥。

〔关键词〕 药根碱;内源性凝血途径;凝血因子Ⅻ;分子对接

〔中图分类号〕R285.5       〔文献标志码〕A       〔文章编号〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2021.01.006

〔Abstract〕 Objective To investigate the anticoagulant mechanism of jatrorrhizine with coagulation factor Ⅻ（FⅫ） as the target. Methods Factor Ⅻ （FⅫ）， actived coagulation factor Ⅻ （FⅫa）， coagulation factor Ⅺ （FⅪ） and actived coagulation factor Ⅺ （FXIa）， which are the key target proteins in the contact activation stage of endogenous coagulation pathway， were performed molecular docking with jatrorrhizine by the Ledock software， the binding activity between jatrorrhizine and contact activation factors was determined by the threshold that binding energy lower than -5 kcal/mol; the activated partial thromboplastin time （APTT）， prothrombin time （PT） and thrombin time （TT） were detected by vitro coagulation test; the inhibitory effect of jatrorrhizine on the activities of FⅫ， FⅪ， coagulation factors Ⅸ （FⅨ）， coagulation factors Ⅷ （FⅧ）， coagulation factors Ⅹ （FⅩ） and coagulation factors Ⅶ （FⅦ） was detected by factor deficient plasma correction test; Western blot was used to detect the inhibitory effect of jatrorrhizine on activation of FⅫ protein. Results （1） The molecular docking experiments showed that the binding energies of jatrorrhizine with FⅫa and FXIa were lower than -5 kcal/mol， which indicated high binding activity. （2） Jatrorrhizine prolonged APTT at 0.2-0.8 mg/mL （P<0.01）， but did not prolong PT and TT （P>0.05） in vitro experiment. （3） Various concentration of jatrorrhizine significantly decreased the activity of FⅫ （P<0.01）， high concentration of jatrorrhizine （0.8 mg/mL） decreased the activity of FⅪ （P<0.05）， but  had no significant effect on the activities of FⅨ， FⅧ， FⅩ and FⅦ （P>0.05）. （4） Various concentration of jatrorrhizine significantly inhibited the activity of  FⅫ protein（P<0.01）. Conclusion Jatrorrhizine has a good docking with FⅫa. It can significantly prolong APTT， inhibit activation of FⅫ protein and reduce the activity of plasma FⅫ. All suggested that antithrombotic effect of jatrorrhizine may be exerted by inhibiting the activity of FⅫ.

〔Keywords〕  jatrorrhizine; endogenous coagulation pathway; coagulation factor Ⅻ; molecular docking

血栓形成是严重威胁人类健康的一种病理过程。以血栓形成为基本病理特征的心脑血管疾病如中风、心肌梗死等，起病急、病情重、死亡率高，占非传染性疾病总死亡率的44%，已成为我国人口死亡与致残的首位原因[1]。目前，应用的抗血栓药可分为抗血小板药、抗凝血药和溶血栓药三大类[2]。随着人们对血栓形成机制的不断深入了解，以直接抑制凝血酶或抑制凝血因子Xa为作用靶点的抗栓药物也逐渐普及，但这些药物均干扰生理性止血过程，存在较严重的出血不良反应[3]。近……