范华

（上海复星长征医学科学有限公司，上海200444）

1 材料与方法

1.1 仪器

运涛Lumiart-II-3 全自动化学发光测定仪（合肥运涛光电科技有限公司）。

1.2 试剂

长沙中生众捷生物技术有限公司的胃泌素17 检测试剂盒（化学发光法）（批号：2020110112-2）及配套的校准品（批号：2020110112-2）和质控品（批号：2020110112-2），试剂、校准品和质控品均在有效期内使用，符合厂家说明书和技术要求的指标。

1.3 评价方法

1.3.1 精密度评价。按照CLSI EP5-A3[1]指南文件制订方案：6 个浓度水平，3 个仪器系统，5 天实验，每天测定1 批，每批每个水平重复测定5 次，计算重复性、实验室内精密度和再现性。

1.3.2 准确度评价。采用回收试验[2]进行评价：选择人源性样品（浓度为1.21pmol/L）为基础样本；取900μL 基础样本和100μL 浓度为12.30pmol/L 的标准溶液作为回收样品1；取900μL 基础样本和100μL 浓度为48.00pmol/L 的标准溶液作为回收样品2；取900μL 基础样本和100μL 浓度为200.00pmol/L 的标准溶液作为回收样品3。基础样品、每份回收样品重复测定3 次，取平均值，计算回收率，在85～115 范围内回收率符合要求。

1.3.3 分析灵敏度评价

1.3.3.1 检出限（LOD）。参考CLSI EP17-A2[3]指南文件制订方案：2 个空白样品、2 个检测出限样品、1 个仪器系统，3 天实验，每天测定1 批，每批每个样品重复测定5 次。在设定两类错误水平条件：α=0.05，β=0.05 时的最低检出限。

1.3.3.2 定量限（LOQ）。参考CLSI EP17-A2 指南文件制订方案：选择G-17 低水平样品1 份（3.5pmol/L），用校准品S0（0pmol/L）按1:2、1:4、1:8、1:16、1:32 和1:64 进行倍比稀释，作为6 个定量限浓度样品、3 天实验，每天测定1 批，每批每个样品重复测定3 次，分别计算原倍样品和6 个定量限浓度样品的浓度平均值，标准差和CV，以浓度平均值和CV 建立数学模型，取CV 为10%（厂家声明的精密度要求）时对应样品的浓度值作为定量限。

1.3.4 线性范围验证。参考CLSI EP6-A2[4]指南文件制订方案：用低浓度和高浓度线性样品各1 份，按照等比例关系稀释成11 个系列浓度样本。每个样本重复测定3 次，记录结果。以三次测量的平均值为实测值和计算的预期值进行多项式回归分析，将所得数据拟合为一阶、二阶和三阶多项式，评估所检测的浓度范围是否为线性。

1.3.5 参考区间验证。参考CLSI EP28-A3c[5]指南文件制订方案：测定20 份表观健康人样本，验证试剂盒给定的参考区间的适用性。若20 份样本检测结果在参考区间的人数≥18 份，则验证通过，否则需要重新验证或确认。

1.3.6 统计学方法。采用SPSS 22.0、Analyse-it 和Minitab 17.0 软件进行数据统计分析，P＜0.05 为差异具有显著性的意义。

2 结果

2.1 精密度评价结果

低、中、高水平样品分别标记为P1、P2、P5，同时3 个实验点检测的低、中、高水平的质控品分别标记为Q3、Q4、Q6；P1、P2、Q3、Q4、P5、Q6 样本测定的精密度结果见表1。G-17 浓度在1～50pmol/L 范围内，该检测方法的重复性、实验室内精密度和再现性均符合厂家要求＜10%。

表1 实验室的精密度评价结果

2.2 准确度评价结果

见表2，根据相关公式计算回收率，添加三个水平的回收率分别为98.4%、103.8%、96.4%，均在85.0%～115.0%范围内，符合该仪器的性能要求。

表2 回收试验结果

2.3 分析灵敏度评价结果

2.3.1 检出限（LOD）

G-17 空白样本测试数据不符合正态分布，需按照非参数法评估空白限（LOB），低浓度样本符合正态分布，采用参数法评估检出限（LOD）。由表3 结果和图1 可得知LOB 为0.04pmol/L，LOD 为0.07pmol/L，符合声明的检出限≤0.50pmol/L 的要求。

表3 空白限（LOB）和检出限（LOD）

2.3.2 定量限（LOQ）

根据要求CV 具有或最接近10%所对应浓度值即为G17 的定量限，根据表4 结果和图2 模型可计算在CV 最接近10%的时候G-17 的预期浓度值为0.26pmol/L，即LOQ 为0.26pmol/L，符合声明的定量限≤1.00pmol/L 的要求。

2.4 线性范围验证结果

图1 空白限（LOB）和检出限（LOD）分布图

表4 定量限（LOQ）

11 个系列浓度水平G-17 样品测定均值分别为0.03、6.52、10.74、14.50、18.50、23.89、28.40、35.97、42.08、44.37 和49.94pmol/L，计算SDr=0.398，CVr=1.2%, 小于设定的允许集合误差目标2%。以线性样本的稀释度作为X，实测浓度均值作为Y，对数据组进行多项回归分析和线性检验，得到一阶方程Y=0.9966X+0.06276；二阶方程中的b2的P 值为0.0668；三阶方程中b2、b3的P 值分别为0.153 和0.260。结果显示二阶和三阶多项式中的回归系数与0 进行比较，均无显著性差异（p＞0.05），故该数据组具有线性，为一阶线性方程。

2.5 参考区间验证结果

20 名表观健康者G-17 检测结果均在试剂盒声明的参考区间内（1-7pmol/L），通过验证。

3 讨论

胃泌素包括胃泌素源、甘氨酸、延伸型的胃泌素和酰胺化胃泌素多种类型。胃泌素17（Gastrin17，G-17）是属于胃泌素中分泌的激素类型一致，一种重要的胃肠激素，它主要由G 细胞分泌的胃肠激素。G 细胞是典型的开放型细胞，以胃窦部最多，其次是胃底、十二指肠和空肠等处。人胰岛的D 细胞亦能分泌胃泌素。它能够调节消化系统的功能，维持消化道黏膜的结构完整，有重要的作用。目前人体有95%以上有生物活性的胃泌素就是α 酰胺化胃泌素[6]，主要含有两种G17 和G34，而G17 占有80%到90%。如果胃泌素17 偏高，可能影响胃的消化吸收功能，而导致出现胃肠道的疾病，比如胃炎，胃溃疡等。因此G-17是反映胃黏膜损伤情况的重要指标。以胃泌素17 作为核心指标的人体血清胃功能检测项目可以有效地减少胃癌患病风险，大幅度地提高胃癌疾病的早诊以及早治概率，对于各种胃病的预防和治疗都具有重要的积极意义。血清G-17 检测可以反映胃窦部黏膜萎缩情况[7]。血清G-17 水平取决于胃内酸度及胃窦部G 细胞数量。因此，高胃酸以及胃窦部萎缩患者的空腹血清G-17 浓度较低。与血清PG 检测相结合，血清G-17 浓度检测可以诊断胃窦（G-17 水平降低）或仅局限于胃体（G-17 水平升高）的萎缩性胃炎。当人体内胃泌素17 处于低值状态时，通常提示患者的胃部存在一些高酸的状况。而当胃泌素17 处于高值状态时，则提示患者的胃内部存在一些炎症，患者可能表现出一些高胃泌素血症的发病症状。这种情况可能跟幽门螺旋杆菌感染、胃溃疡以及药物影响有关系。另外，胃泌素17 的变化与患者的胃部受到饮食刺激以及患上其他疾病也有一定的联系。

图2 精密度曲线图

4 结论

本研究结果显示化学发光磁微粒免疫法检测G-17 的精密度、准确度、分析灵敏度、线性范围和参考区间等各项性能指标均符合要求。精密度是反映检测系统整体性能的基本指标，本实验参考了CLSI EP5-A3 文件，用不同浓度的G-17 样本和质控品对重复性、实验室内精密度和再现性等3 种精密度进行评价，G-17 重复性分别为2.1%、2.0%、3.6%、2.8%、1.8%和2.5%，实验室内精密度分别为5.0%、2.5%、3.8%、2.8%、2.0%和3.4%，再现性分别为5.5%、4.0%、5.4%、3.0%、2.9%和4.2%，其CV 结果均小于厂家的声明结果，符合要求。检测系统的准确度评价是均匀样本的一系列测量结果中系统测量误差的性能特征，一般可采用分析参考物质、方法学比对和回收试验，本研究采用低、中、高三个水平的回收率（98.4%、103.8%和96.4%）和平均回收率（99.5%），均在厂家可接受范围内，符合要求。分析灵敏度是评价检测系统的一个重要性能指标，能很大程度上体现检测系统的检测能力，包括空白限（LOB）、检出限（LOD）和定量限（LOQ）；尤其G-17 在低浓度水平有重要临床意义，其检测方法的下限尤为重要，检出限和定量限是评估检测方法下限的指标，空白限是建立和验证检出限时的必要条件。本研究的LOB为0.04pmol/L，LOD 为0.07pmol/L，LOQ 为0.26pmol/L，均符合厂家的声明要求，表明G-17 在该检测系统具有很好的检测方法下限。线性范围是性能评价的关键指标，CLSI EP6-A2 文件表明要求线性区间的建立需要对线性试验进行多项回归分析，并进行线性检验。本研究表明磁微粒化学发光法检测G-17 在线性范围0.03～49.94pmol/L，通过线性检测，最适方程为一阶直线方程。本研究根据CLSI EP28-A3c 文件，进行了G-17 的参考区间验证，其参考区间在1～7pmol/L 的验证通过，符合厂家声明。总之，在运涛Lumiart-Ⅱ-3 发光测定仪检测G-17，对其主要性能指标进行评价，验证结果符合厂家声明，具有良好的性能，符合临床质量要求。