王育伟，刘亚东，周玉刚，张晓晖，周爱民，李廷见

（绵阳市农业科学研究院畜禽水产研究所，四川 绵阳 621023）

大肠杆菌（E.coli）是养殖环境中存在最为广泛的病原菌之一［1］，常单独或混合感染引起家禽细菌性疾病，每年给家禽养殖业造成了巨大的经济损失。E.coli单纯感染可引起禽大肠杆菌病［2］，主要症状包括心包炎、失明、腹泻、滑膜炎、大肠杆菌性肉芽肿和脐炎等。常与沙门氏菌（Salmonella）和鸡毒支原体（Mycoplasma gallisepticum，MG）共同感染引起鸡白痢、鸡毒支原体病等疾病［3］。

细菌鉴定对精准的用药和疾病防控具有重要意义，除了常规的形态学鉴定方法以外，分子生物学鉴定方法因分型精确等优点而成为重要的鉴定方法。16S rDNA 序列是研究细菌系统发育和分类最常用的管家遗传标［4］，atpD 基因等功能基因也非常有助于细菌进化分析［5］。本研究对从绵阳一养鸡场腹泻病例中分离到的M1菌进行鉴定，并建立16S rDNA 和atpD 基因遗传进化分析，为科学防控该类疾病提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料 从四川省绵阳市游仙区一养鸡场腹泻病例中分离出1 株细菌，命名为M1 菌。

1.2 主要试剂 糖铁琼脂、麦康凯培养基，购自成都康迪生物科技有限公司；伊红美蓝培养基，购自青岛日水生物技术有限公司；微量生化反应管，购自杭州天和微生物试剂有限公司；细菌基因组DNA 提取试剂盒（TIAN amp Bacteria DNA Kit），购自天根生化科技（北京）有限公司。

1.3 菌株的分离培养 将采样拭子置于5 mL LB 培养基中，37 ℃振荡培养6～8 h，然后于普通固体培养基上划线，37 ℃培养24 h，革兰氏染色后镜检，观察细菌形态。……