徐 飞，郑泽航，徐汉青，杨 卿

(华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科，湖北省武汉市430030)

随着中国老龄化社会的进展，衰老相关性研究逐渐成为热点。人体骨骼也会随着年龄的增长而发生衰老，其中骨髓间充质干细胞(bone marrow stem cell，BMSC)的衰老对骨骼系统的衰老起着至关重要的作用。研究衰老BMSC的特性及生物学功能需要大量的衰老细胞，而衰老细胞的增殖能力较差，无法通过传统的传代培养方法来快速获取足量的细胞。现阶段获取衰老BMSC的方法主要有以下几种：①直接从衰老个体的骨髓中分离提取衰老的间充质干细胞，但高龄小鼠比较难获得，且分离提取的细胞量较少，难以进行细胞扩增；②分离培养正常的BMSC，经过体外培养与传代处理获得自然衰老的BMSC，但此过程时间较长，通常需要多次传代培养[1]；③通过化学与射线照射等方法造成细胞DNA损伤，获得衰老的BMSC模型[2]。

为了建立一种快速、有效且稳定的获得小鼠衰老BMSC的方法，本文根据相关文献及前期预实验[3-5]，采用200 μmol/L过氧化氢(H2O2)处理正常的小鼠BMSC 2 h[5]，处理完毕后，检测相关衰老指标来确认所获得的细胞为衰老的BMSC，以期建立一种快速有效且稳定的衰老BMSC模型。

1 材料和方法

1.1 小鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养及鉴定

取3周龄C57BL/6小鼠(华中科技大学实验动物中心提供)，收集其双侧股骨与胫骨，取髓腔内细胞全骨髓培养法进行培养，获得BMSC，具体分离培养及鉴定方法参考文献[6]。

1.2 H2O2诱导衰老骨髓间充质干细胞模型

取所分离的第3代小鼠BMSC，以1×104个/cm2细胞接种于25 mL培养皿中，培养皿中含5 mL完全培养基[α-MEM(Hyclone公司，美国)，10%胎牛血清(Gibico公司，美国)，1%抗生素]。……