魏 楠，谷 峰

(中国农业科学院 上海兽医研究所，上海200241)

成簇规律间隔短回文重复与Cas9蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR/Cas9)是第三代基因组编辑技术。基因组编辑技术基于基因靶向修饰，从而实现对目标基因定点敲除和外源基因定点整合，已经被用于多种模式动物的品种改良和疾病防治，基因组编辑技术先后经历了大范围核酸酶、锌指核酸酶(ZNF)、类转录激活因子效应物核酸酶(TALEN)等技术的发展。CRISPR/Cas9技术作为目前应用最广泛的基因编辑工具，为预防和控制病毒感染提供了新的思路，例如可用于全基因组筛选病毒毒力基因、通过靶向病毒基因缺失或突变生产减毒疫苗、研发动物抗病育种等。

1 CRISPR/Cas9技术在猪病毒性疾病防控中的应用

猪临床上的病毒性疾病主要包括非洲猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪瘟、伪狂犬病、猪流行性腹泻和猪流感等，这些疾病都具有较高的发病率和病死率等特点，对养猪业的发展造成极大的威胁。猪作为一种重要的农业经济动物和大型模式动物，对其进行基因组编辑不仅能提高生产性能、加速新品种的培育，还为相关病毒性疾病的防治提供了新的思路。

1.1 非洲猪瘟非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起的一种急性、烈性、高度接触性传染病,给全球养猪业带来巨大经济损失。猪巨噬细胞是ASFV的主要天然宿主细胞[1]，尽管被敲除的巨噬细胞表面蛋白CD163也被认为是一种潜在的ASFV受体，然而CD163基因编辑猪却不能抵抗ASFV的感染[2]。传统的ASFV疫苗研究存在不同程度的局限性，通过建立ASFV CRISPR/Cas9基因编辑技术平台，将为ASFV基因功能研究提供便捷的工具，加快疫苗研究进程。……