杨锋 李文雄 康武林 董博 袁普卫

陕西中医药大学 陕西高校青年创新团队，陕西中医药大学附属医院，陕西 咸阳 712046

长链非编码RNA(lncRNA)是近年来发现的重要的表观遗传学调控手段，可多层次调控基因表达，影响干细胞的多能性和发育，从而调控干细胞的分化命运。作者前期研究[1]表明一些补肾中药能通过DNA甲基化、组蛋白去乙酰化等表观遗传学机制显著促进成骨相关基因及蛋白表达。其中，补肾中药补骨脂的有效组分补骨脂素具有较强的成骨作用，可以诱导骨髓间充质干细胞成骨分化。已有研究[2]证实多种lncRNA参与了BMSCs 的成骨分化，lncRNA在调节BMSCs增殖与分化方面具有重要作用，与各种骨骼疾病有着密切的关系。但有关中药介导lncRNA调控BMSCs成骨分化的作用机制报道较少。本研究通过lncRNA芯片、生物信息学、Real time RT-PCR等技术筛选出补骨脂素调控BMSCs成骨分化相关的lncRNA，为揭示lncRNA在补骨脂素调控BMSCs成骨分化中的表观遗传学机制奠定基础，从而进一步促进中医“肾主骨”理论的转化应用。

1 材料和方法

1.1 实验动物

选取4～6周龄SD大鼠10只，清洁级，雌雄各半，体重(90±10)g，由西安交通大学实验动物中心提供(合格证号：61001700000815)。饲养温度20～25 ℃，相对湿度50 %，全价营养饲料喂养。

1.2 主要试剂及仪器

L-DMEM(Gibco，Invitrogen，USA)、胎牛血清(FBS，Gibco，Invitrogen，USA)、DMSO、地塞米松、β-甘油磷酸钠、抗坏血酸、1-3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、吲哚美辛、胰岛素、MTT(Sigma USA)、补骨脂素标准品(Sigma)、Total RNA提取试剂盒(Promega)、RT-PCRKit(Invitrogen，USA)、mRNA引物(华大基因)、胰蛋白酶(Gibco USA)、CO2孵箱(Thermo，USA)、倒置相差显微镜(Olympus)、Bechman Epicx流式细胞仪、水平式电泳仪(Bio-Rad，Hercules，CA)、凝胶成像分析系统(Dolphin DOC，Wealtec，USA)、PCR 仪(Rotor-Gene 3000 Corbett Research，Australia)、酶联免疫标记仪(Bio-Rad 550)。

1.3 BMSC体外培养与鉴定

经戊巴比妥麻醉后，无痛下颈椎脱臼法处死；……