李 凯，于 潼，于成东，于 宁，庄忻雨，汪 伟，陈振海，田明尧*，金宁一* (1.扬州大学 兽医学院，江苏 扬州 5100；.军事医学研究院 军事兽医研究所,吉林 长春 1301)

流感病毒是正黏病毒科的成员，正黏病毒科是一组包膜病毒，其中包含分段的负义单链RNA基因组。3种主要类型的流感病毒(A、B和C)感染人类，其中甲型和乙型流感病毒每年引起大量发病和死亡[1]。因此，具有广谱抗流感的疫苗亟待研发[2]。

血凝素(HA)是流感的主要抗原，它在免疫过程中，诱导中和抗体的产生。虽然HA蛋白结构高度变异，但其第二亚基(HA2)形成相对保守的颈部结构域，在病毒感染早期阶段起重要作用[3]。M2e是甲型流感病毒的跨膜区，自1993年以来，它的序列在人类分离物中几乎没有变化，并且与动物源性菌株进行对比，只有几个氨基酸不同[4]。许多基于M2e候选疫苗产生特异性体液免疫以抵挡甲型流感的攻击[5]，M2e和HA2结合的蛋白质疫苗是开发广谱流感疫苗的一个有效途径[6-7]。然而，M2e和HA2本身免疫原性就很差，刺激机体产生较少的多肽抗体[8]。这些抗原与高度免疫原性佐剂或蛋白载体融合可增强其免疫原性[8-9],最有希望提高免疫原性的是铁蛋白纳米颗粒，在抗原递呈中起着至关重要的作用[10]。本试验按照大肠杆菌偏爱密码子对序列M2e-HA2-Ferrtin进行优化并合成，以pGH-T-M2e-HA2-Ferrtin为模板，扩增目的片段并克隆至原核表达载体pET32a，表达纯化出流感多表位重组蛋白，为广谱流感疫苗的研制奠定基础。

1 材料与方法

1.1 试验材料T4DNA连接酶购自美国NEB公司；Mouse Anti-6X His tag®antibody和Goat Anti-Mouse IgG H&L(HRP)、His标签蛋白纯化试剂盒(可溶性蛋白)购自康为公司；……