王朋林，陈凯丽，郑 玲，刘林科，王荣军，张龙现，宁长申，菅复春 (河南农业大学 牧医工程学院，河南 郑州 450046)

猪囊孢球虫(Cystoisosporasuis)原名猪等孢球虫(Isosporasuis)，归类于真球虫目(Eucoccidiorida)、肉孢子球虫科(Sarcosporidae)、囊等孢球虫属(Cystoisospora)。猪囊孢球虫可感染不同品种和不同年龄阶段的猪，尤其对哺乳仔猪的危害最为严重，临床症状可表现为非出血性腹泻[1]，治疗不当会导致僵猪或死亡，严重影响我国养猪业的发展。毕氏肠微孢子虫(Enterocytozoonbieneusi)是一种可感染人和多种动物胃肠道的人兽共患病原。1985年首次在艾滋病(HIV)患者中发现[2]。一般情况下，感染此病原后免疫功能正常的机体无明显的临床症状，但对HIV患者和免疫功能低下的儿童会造成持续性腹泻并伴有发热、食欲下降和体质量减轻等症状[3]。此外，毕氏肠微孢子虫感染宿主广泛，如非人灵长类动物(NHP)、反刍动物、哺乳动物、啮齿动物等，并对它们的胃肠道造成严重损伤，因此引起世界各国研究者的高度关注[4]。近年来，随着分子生物学技术的快速发展，具有简便、快速、准确等优点的PCR检测技术已被广泛应用于各种肠道原虫的分子流行病学调查[5-7]。目前尚无关于猪囊孢球虫和毕氏肠微孢子虫的双重nest-PCR方法，本研究旨在建立一种快速、准确、简便、可同时诊断猪囊孢球虫和毕氏肠微孢子虫的双重nest-PCR方法，以期能快速鉴定两种病原，为猪肠道原虫病的防控提供技术支持。

1 材料与方法

1.1 病原猪囊孢球虫、毕氏肠微孢子虫、安氏隐孢子虫、十二指肠贾第虫、芽囊原虫均由本实验室分离鉴定;大肠杆菌菌株由本院微生物学实验室馈赠。……