时庆贺，马宁宁，刘 占，邓梦梦，郭子仪，史志斌，陈 陆，王川庆 (河南农业大学 动物医学院，河南 郑州 450002)

猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2，PCV2)主要引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(postweaning multisystemic wasting syndrome，PMWS)。PCV2感染能够引起机体产生严重的免疫抑制，易并发和继发其他传染病，从而增加猪群的发病率和死亡率。ORF2编码的Cap蛋白可与宿主细胞的病毒受体结合，是PCV2主要的免疫原蛋白[1-3]。自2011年底以来，伪狂犬病病毒(pseudorabies virus，PRV)变异株在我国大部分地区流行造成猪伪狂犬病(porcine pseudorabies，PR)再次暴发，已有的PR基因缺失活疫苗不能对PRV变异毒株提供100%保护的报道[4]。白介素2(interleukin 2，IL-2)作为免疫佐剂能诱导T淋巴细胞增殖和分化，增强自然杀伤细胞的杀伤作用，提高单核巨噬细胞吞噬和抗原识别能力，在细胞和体液免疫反应中起关键作用，克服了传统佐剂的缺点[5-7]。因此，IL-2有望成为一种安全、经济、高效的新型免疫佐剂。基于PR基因缺失活疫苗的成功应用以及PRV大部分基因如TK基因[8]是病毒复制非必需的。因此，将PRV流行变异株作为载体，在其基因组上插入外源基因，构建病毒活载体疫苗可达到“一针多防”的效果[9]。本研究拟将PCV2 YY株ORF2和猪IL-2基因插入到前期用PRV QYY变异株构建的rPRV-gE-/TK-/EGFP+缺失的TK基因位点，评价重组病毒免疫原性，以期获得有效预防PMWS及PR的重组活载体疫苗株。

1 材料与方法

1.1 质粒、细胞及毒株含有CMV启动子和polyA尾的pZJ-1真核表达载体及以pMD18-T为载体含有PRV TK基因上下游同源臂的重组质粒pTK、rPRV-gE-/TK-/EGFP+毒株和rPRV-gE-/TK-/ORF2+重组病毒为本实验室构建并保存；E.coliDH5α感受态细胞、非洲绿猴肾细胞(Vero)、人肾上皮细胞(293T)、仓鼠肾细胞(BHK-21)、PRV QYY株(2012年分离流行株)和PCV2 YY毒株(PCV2d)为实验室保存。……