贾妙妙，王国康，李 丽，王红琳，罗青平，邵华斌，曾 驰，温国元* (1.武汉轻工大学 生物与制药工程学院，湖北 武汉 43003；.湖北省农业科学院 畜牧兽医研究所/农业部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室/湖北省畜禽病原微生物学重点实验室，湖北 武汉，430064)

NP蛋白是含量最为丰富和保守性最高的病毒结构蛋白，其基因全长约为1.7 kb，开放阅读框长度1.47 kb，共编码489个氨基酸，相对分子质量为53 kDa。NP与L和P蛋白相互协作，调控病毒基因组的复制与转录[14]。NP蛋白的N端结合RNA，高度保守，其C端含有磷酸化位点和抗原决定簇位点。NP蛋白具有较强的免疫原性，但不具有免疫保护作用[15]。本研究采用原核表达系统，表达纯化NDV NP蛋白，以其为包被抗原，建立基于NP蛋白的NDV间接ELISA抗体检测方法，进一步分析其敏感性、特异性、重复性及其与HI检测方法的符合率，旨在为该方法的临床应用提供试验依据。

1 材料与方法

1.1 毒株、血清和载体NDV LaSota株和6种禽类病原的阳性血清，包括NDV、H9亚型禽流感病毒(AIV)、J亚群禽白血病病毒(ALV-J)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV)、禽大肠杆菌和沙门菌，均由本实验室保存。30份NDV阴性血清采集自1月龄SPF鸡。200份鸡血清样品采集自湖北、山东、河南和江苏省养殖场。原核表达宿主菌E.coliBL21-CodonPlus(DE3)和表达质粒pET-30a购自德泰生物科技有限公司。

1.2 主要试剂病毒RNA提取、DNA回收和质粒提取试剂盒均购自天根生化科技有限公司；RT-PCR反应试剂、T4DNA连接酶和Taq DNA聚合酶购自宝生物工程有限公司；Ni-IDA琼脂糖凝胶购自德泰生物科技有限公司；Bradford蛋白浓度测定试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司；……