范 晴，谢芝勋，谢志勤，谢丽基，黄娇玲，张艳芳，曾婷婷，王 盛，罗思思 (广西兽医研究所 广西兽医生物技术重点实验室，广西 南宁 530001)

牛轮状病毒(bovine rotavirus，BRV)和牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea disease virus,BVDV)是2种常见牛腹泻病毒，症状相似，难以区分。BVDV临床上常出现发热、腹泻、黏膜损伤和趾部损伤，但大多数感染BVDV的牛为持续性感染且不表现临床症状，一旦再次接触相似性抗原便会继发为黏膜病，病死率100%。持续感染的牛可通过血液、排泄物等多种途径水平传播病毒，还可通过生殖道垂直传播，且终身带毒，持续排毒，成为牛场腹泻症的重要传染源，对养牛业存在潜在危害。BRV主要感染1～30日龄初生犊牛，可引起犊牛腹泻、脱水、呕吐和酸碱平衡[1-4]。2种病毒经常混合感染，感染后病程加重，我国每年因腹泻病引起的经济损失高达数亿元，因此急需建立这2种病的快速检测技术，为我国BRV和BVDV的防控提供技术支持。

目前常用的诊断方法主要有血清学方法、病原分离和分子生物学方法(RT-PCR和荧光RT-PCR)[5-8]。环介导恒温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)是一种基于PCR发展起来的新兴核酸扩增技术，它解决了PCR多温度扩增的技术难点，采用恒温扩增，6条引物(针对8个区域)同时扩增效率增加、敏感性高、特异性好，经常应用于疾病诊断及基因筛选[9-12]。多重LAMP是一种高效的LAMP形式，一次LAMP反应，可同时检测、鉴别多种病原体。但目前国内的多重LAMP方法都有一定的局限性，不能准确地检测是哪一种病原引起的阳性结果，都没有实现真正意义上的鉴别诊断。本研究建立的BRV和BVDV二重RT-LAMP方法，在LAMP引物中标记荧光基团，反应后通过扩增产物的颜色读取反应结果，可准确鉴别诊断BVDV和BRV两种病毒。……