史喜菊，刘艳华，马贵平，李炎鑫，刘全国，赖平安，高志强，徐立伟 (北京海关，北京 100026)

我国自2018年发生非洲猪瘟疫情后，对活猪和猪肉制品的进口量剧增，为了保障进出口产品的安全性，出入境的活猪和猪肉制品都要经过严格检疫。目前检疫的主要猪病都是对养殖业危害巨大、OIE重点关注、世界各国重点防控的疫病[1-3]。现有检测方法基本还是针对单个病原的单一检测，会造成漏检。而且，进境动物经过长途运输后，在隔离检疫期间可能会出现一些临床疾病，很多病原都可以引起相似的临床症状，现有单一检测技术难以全面、真实地反映畜禽感染状态和发病死亡原因[1-2]。因此，建立可同时检测多重疾病的多重检测技术一直是口岸和各级兽医卫生防疫机构研究工作的重点。本试验是在前期建立的多病原同步检测技术基础上[2-4]，进一步以古典猪瘟病毒(classical swine fever virus，CSFV)、非洲猪瘟病毒(African swine fever virus，ASFV)和猪水泡病病毒(swine vesicular disease virus，SVDV)为研究对象[2,5-10]，建立了可用于这3种病毒混合感染检测和鉴别诊断的多重荧光PCR方法。

1 材料与方法

1.1 试验材料CSFV、ASFV和SVDV阳性质控品均为本实验室制备并保存的体外反转录cRNA或者重组质粒[2-3,9]。测试所用的CSFV、ASFV及猪圆环病毒2型(PCV2)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪流感病毒(SIV)、O型口蹄疫灭活病毒(FMDV)和水泡性口炎病毒(VSV)均为本实验室制备的核酸样质控品[3]和检测留样。

1.2 试剂克隆载体和体外转录试剂均为Promega公司产品;Ex-Taq PCR试剂为TaKaRa公司产品;Path-IDTMMultiplex one-step RT-PCR Kit为AB公司产品；TIANamp Virus DNA/RNA Kit为天根生化公司产品；……