（宁夏动物疾病预防控制中心，宁夏银川 750001）

非洲猪瘟（African swine fever，ASF）是由非洲猪瘟病毒（African Swine fever virus，ASFV）引起家猪和野猪的一种急性、热性、高度接触性传染病，发病过程短，死亡率可高达100%，对养猪业危害极大。因此，世界动物卫生组织（OIE）将其列为须通报动物疫病，我国将其列为重点防范的一类动物疫病[1]。

目前，ASFV 的实验室检测方法主要有PCR、荧光PCR、ELISA 等。相较于ELISA 方法，荧光PCR 方法在猪感染早期即可检测到ASFV 核酸，具有快速、准确、敏感性高等优点，是监测和早期诊断ASF 的重要手段，同时用荧光PCR 方法检测ASFV 也是OIE 认可的方法。

2018 年8 月3 日我国首例ASF 疫情被确诊以来，各种ASFV 检测试剂盒在我国ASF 防控中发挥了重要作用，但同时如何选用最合适的试剂盒开展防控工作，成为各兽医实验室面临的一项重要工作。为探究ASFV 标准物质作为试剂盒评价体系的可行性，本研究使用ASFVP72基因核酸标准物质作为评价标准，对市场上5 种主流品牌ASFV荧光PCR 检测试剂盒的检测性能进行对比分析，以期为各实验室的ASFV 荧光PCR 检测试剂盒选择提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料和试剂

ASFVP72基因核酸标准物质（质粒浓度5.9×103拷贝/μL），由中国动物疫病预防控制中心提供。5 个厂家（A、B、C、D、E，均为国产）生产的ASFV 荧光PCR 检测试剂盒信息见表1。无菌无核酶水，购自Promega 公司；一次性移液器吸头，购自Axygen 公司。

表1 5 个厂家生产的ASFV 荧光PCR 检测试剂盒信息

1.2 仪器和设备

单道微量移液器和多道微量移液器，购自Eppendorf 公司；iQ5 荧光定量PCR 仪，购自美国Bio-Rad 公司。

1.3 方法

将ASFVP72基因质粒标准物质进行10 倍倍比稀释（5.9×103～5.9×10-5拷贝/μL），设置3 个平行对照，使用5 个厂家的ASFV 检测试剂盒，严格按照试剂盒使用说明书，对不同浓度倍比稀释的标准物质进行检测，比较不同试剂盒之间的反应时长，并通过制作标准曲线分析不同试剂盒的敏感性和重复性。……