孔令伟,吕宪宝

膀胱癌(bladder cancer,BCa)又称膀胱尿路上皮癌,多发于男性,位居男性肿瘤发病率的第9位,死亡率的第8位[1-2]。临床上BCa复发率很高,膀胱癌细胞迁移侵袭肌层、膀胱周围组织或血管,严重影响BCa转移、复发和预后[3-4]。因此探究影响膀胱癌细胞增殖、侵袭和迁移的新靶点,对于临床上治疗BCa意义重大。人微小核糖核酸(microRNA,miRNA)可与mRNA结合,从而参与调控细胞增殖、分化、凋亡等进程[5]。miR-145具有抑癌作用,影响肿瘤侵袭和增殖,研究表明,miR-145在膀胱癌组织中下调,抑制膀胱癌细胞上皮间质转化,但是关于miR-145调控膀胱癌细胞增殖、侵袭和迁移的相关机制不明[6]。锌指蛋白转录因子5(zinc finger protein transcription factor 5,KLF5)广泛表达在人体不同组织中,高表达时有助于肿瘤增殖、侵袭和迁移,是恶性肿瘤发生发展的关键因子[7]。在BCa中,miR-145能否通过靶向调控KLF5,进而抑制膀胱癌细胞增殖、侵袭、迁移尚不清楚,因此本研究测定miR-145 mimic转染后BIU-87细胞miR-145、KLF5及相关蛋白表达水平,分析其对BIU-87细胞增殖、侵袭、迁移的影响,探究调控机制。

1 材料与方法

1.1 试剂和仪器

RMPI 1640培养液(货号:31800)、特级胎牛血清(货号:S9000)、总RNA提取试剂盒(货号:R1200)、RP1100通用RT-PCR试剂盒(货号:RP1100)均购自北京索莱宝科技有限公司;兔抗人KLF5(货号:FNab04600)、兔抗人PI3K(货号:FNab09857)、兔抗人PCNA(货号:FNab06215)、兔抗人MMP-9(货号:FNab05247)、兔抗人MMP-2(货号:FNab05238)、兔抗人E-cadherin(货号:FNab02617)、羊抗兔二抗(货号:FNSA-0015)均购自武汉菲恩生物科技有限公司;兔抗人AKT(货号:K10080-ZRF)、兔抗人p-AKT(货号:K10770-IZK)均购自北京百奥莱博科技有限公司;miR-145mimic、miR-145阴性对照序列购自上海生工生物公司;VeritiTMPCR仪购自美国赛默飞世尔科技公司;BMM-300型正置三目金相显微镜购自上海巴拓仪器有限公司;ZF-388型全自动凝胶成像分析系统购自上海嘉鹏科技有限公司。……