张 琛，罗成飞，程大友

(1.哈尔滨工业大学 化工与化学学院; 2.哈尔滨师范大学)

0 前言

甜菜是重要的糖料作物，在我国东北、西北、华北具有较大的种植面积。甜菜杂种优势明显，但其花器相对较小，且无限开花，在实际生产中，使用大规模的人工去雄方法是不现实的，若杂交母本具有雄性不育性，不但可以免去人工去雄的麻烦，而且也不会对F1代产生干扰，保持性状稳定[2]，雄性不育植物提供了利用杂种优势重要的育种工具，也提供了研究杂交作物的重要材料。所以自Owen于1945年发现甜菜雄性不育性之后，甜菜杂交种利用便逐渐成为甜菜雨中的主流技术。目前大多数甜菜杂交品种，都是利用细胞质雄性不育(CMS)材料培育而成。迄今为止我国食用甜菜优势育种研究工作尚未开展，目前。

1 材料与方法

1.1 本研究所用实验品种为

来自一年生哈尔滨工业大学自育食用红甜菜品系“食甜一品红”。对照品种为已知育性的自育甜菜系DY5-O(保持系)和DY5-CMS(不育系)，其中CMS系是多次与O型系回交产生的较为稳定的CMS系。

1.2 主要试剂及配制

(1)甜菜幼叶DNA提取实验试剂：CTAB提取缓冲液：CTAB 4 g， NaCl 16.364 g， 0.5M EDTA 8 ml， 1MTris-HCl 20 ml，用70 ml ddH2O先进行溶解， 再定容至200 ml，调节至pH8.0，灭菌，备用。巯基乙醇、氯仿、异戊醇、异丙醇、无水乙醇均为分析纯。

(2)琼脂糖凝胶电泳实验试剂：TAE电泳缓冲液50×：Tris碱242 g，冰醋酸57.1 mL，0.5 mol/L NaZEDTA 100 mL， 加水至1 L调节至pH 8.0，使用时稀释为1×TAE。DL15000 Marker、DL2000 Marker(天根试剂公司)，EtBr染料(宝泰克生物科技有限公司)，上样缓冲液(北京鼎国昌盛公司)，琼脂糖(Gene Tech公司)。

(3)酶及其他试剂。

表1 酶及其他试剂

(4)花粉TTC染色液：准确称取0.5 g 2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)，溶于水中，转移到容量瓶中定容至100 ml.pH7±0.5。……