非洲猪瘟病毒pS273R蛋白水解酶单克隆抗体制备

2021-03-30刘英楠谢振华敖清莹于婉琪金文杰秦爱建扈荣良陈鸿军

畜牧兽医学报 2021年3期

关键词：小鼠

张萌，刘英楠，谢振华，敖清莹，吕璐，于婉琪，金文杰，秦爱建，扈荣良，陈鸿军*

(1.中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200241； 2.军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所，长春 130122；3.扬州大学兽医学院，扬州 225009)

非洲猪瘟(African swine fever, ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)引起的一种急性、烈性、高度接触性传染病，死亡率可高达100%[1-2]，被我国列为一类动物疫病、世界动物卫生组织(OIE)将其列为法定报告疫病。ASFV是非洲猪瘟相关病毒科(Asfarviridae)非洲猪瘟病毒属(Asfivirus)的成员[6]。ASFV病毒粒子直径为260～300 nm，为二十面体对称[7]，结构复杂，不同毒株基因组全长不同，为170～194 kb，中央保守区为125 kb，基因组差异主要取决于基因组两端可变区的多基因家族[8]。

ASFV含有151～167个开放性阅读框(ORF)，成熟的病毒粒子中约含50种以上结构蛋白[9]。其中，由pp220水解产生的p150、p37、p34和p14和由pp62水解产生的p35、p15，均存在于成熟病毒粒子中，占结构蛋白总质量的30%[10-12]。已有研究表明：ASFV蛋白水解酶pS273R蛋白能够识别Gly-Gly-Xaa水解位点裂解病毒多蛋白pp220和pp62，产生上述6种主要结构蛋白。pS273R编码1个31 ku的蛋白质，包含1个“核心域”，具有SUMO-1样蛋白酶保守的催化残基。有研究表明,S273R蛋白酶的水解加工可以影响病毒滴度，抑制pS273R蛋白的水解过程，会导致二十面体病毒粒子的组装缺陷[13]。因此，该蛋白酶功能研究将有助于认识ASFV复制过程。本研究通过原核表达ASFVS273R基因，制备纯化抗原免疫小鼠，通过细胞融合，成功制备获得pS273R单克隆抗体。该蛋白抗体旨在为S273R基因缺失毒株的鉴定及pS273R蛋白酶的功能研究提供生物材料。