李科 肖劲军 曹永清

(长沙市第一医院肿瘤科，湖南 长沙 410005)

肝癌具有恶性程度高、易转移等特点，肝癌转移是肝癌患者死亡的重要诱因〔1〕。肝癌细胞侵袭、迁移和上皮间质转化(EMT)是肝癌转移的关键，靶向抑制肝癌细胞转移潜能对于提高肝癌患者生活质量具有重要意义〔2〕。miRNA是目前研究较多的与正常生命活动和疾病发生有关的非编码RNA，其可以通过靶向调控下游靶基因的表达发挥生物学作用〔3〕。研究显示，肿瘤发生与肿瘤组织中miRNA异常表达有关，这些miRNA可以作为肿瘤分子标志物，通过干扰或重建肿瘤相关miRNA可能是肿瘤治疗的潜在途径〔4〕。miR-760是目前发现的与肿瘤有关的miRNA，miR-760异常表达下调与胃癌进展有关，miR-760可以体外抑制胃癌细胞侵袭能力，后续在乳腺癌等肿瘤中也发现miR-760表达缺失与肿瘤恶性转移有关〔5,6〕。研究表明，miR-760在肝癌中表达下调，并且miR-760表达水平的高低还与肝癌细胞阿霉素抵抗有关〔7〕。本实验旨在研究miR-760对肝癌细胞侵袭、迁移和EMT的影响和调控机制，为明确miR-760在肝癌转移中的作用提供参考，为靶向基因治疗肝癌提供新思路。

1 材料与方法

1.1材料 人肝癌细胞HCC-9204、SNU-449、HuH-7和人正常肝细胞HL-7702购自上海中科院细胞库；叉头框(FOX)C2抗体购自美国Santa Cruz Biotechnology；引物由南京金斯瑞生物科技有限公司合成；miR-760 mimics、mimics control均由上海吉玛制药技术有限公司合成；钙黏蛋白E(E-cadherin)抗体购自美国Abcam；突变型(WT)和野生型(MUT)荧光素酶报告载体由汉恒生物科技(上海)有限公司构建；波形蛋白(vimentin)抗体购自美国Cell Signaling Technology。

1.2qRT-PCR测定miR-760在肝癌细胞中的表达 收集人肝癌细胞HCC-9204、SNU-449、HuH-7和人正常肝细胞HL-7702，在细胞培养瓶中加Trizol，每105个细胞中添加1 ml的Trizol，提取细胞总RNA。……