谷红 裴云逸

玉溪农业职业技术学院 云南玉溪 653100

黄酮类化合物是中药材中最常见活性物质。研究证明：黄酮类化合物具有抗氧化、抗菌等多种生理活性及药理作用，对人类肿瘤，心血管等疾病的治疗和预防有重要意义[1]。

本文选用芦丁为标准对照品，用紫外-可见分光光度法对甘草、葛根、黄芩、金银花四种中药材中总黄酮含量进行测定。

1 仪器与材料

（1）仪器岛津紫外可见分光光度计、电子天平、超声波清洗器、粉碎机、60目筛子。

（2）材料中药材甘草、葛根、黄芩、金银花购自云南玉溪红塔区，芦丁标准品（中检所）、亚硝酸钠（AR）、硝酸铝（AR）、氢氧化钠（AR）、无水乙醇（AR）、水为纯净水。

2 实验部分

2.1 试剂

芦丁标准溶液：精密称定芦丁标准品10mg，置50ml容量瓶中，用体积分数65%的乙醇稀释至刻度，即得浓度为0.2mg/ml的芦丁标准溶液[2]。

5%亚硝酸钠溶液：称取亚硝酸钠2.5g，置50ml容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，摇匀，即得。

4%氢氧化钠溶液：称取氢氧化钠4g，置100ml容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，摇匀，即得[3]。

10%硝酸铝溶液：称取硝酸铝5g，置50ml容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，摇匀，即得。

2.2 样品处理

甘草、葛根、黄芩、金银花中药材粉碎，过60目筛干燥备用。各称取1g，置50ml容量瓶，加入65%乙醇适量溶解，40℃超声波提取45min，用65%乙醇定容至刻度，摇匀，过滤，备用。

2.3 试验方法

准确移取上述芦丁标准溶液0，0.50，1.00，1.50，2.00，2.50ml，分别置10ml具塞刻度试管中，加入5%亚硝酸钠溶液0.30ml，放置6min，加入10%硝酸铝溶液0.30ml，放置6min，再加入4%氢氧化钠溶液4.00ml，用65%乙醇稀释至刻度，摇匀，放置15min，以空白溶液为参比，在508nm处测定吸光度，以测出的吸光度绘制标准曲线，并根据标准曲线计算四种中药材中总黄酮的含量[4]。

3 结果与讨论

3.1 测定波长的选择

准确移取上述芦丁标准溶液5.00ml，置10ml具塞刻度试管中，按上述试验方法操作显色，测波定长400-600nm范围内进行扫描，芦丁最大吸收峰在508nm处，因此，试验选择测定波长为508nm。

3.2 芦丁标准曲线的绘制

按上述试验方法对芦丁标准溶液系列进行测定，以芦丁标准溶液的浓度（x）与吸光度值（y），绘制总黄酮含量的标准曲线，得线性回归方程：y=13.72593x-0.00034，相关系数R=0.99930。

3.3 方法学研究

3.3.1 精密度试验

将样品提取液重复测定6次，测定结果如下表1，计算其相对标准偏差为0.49%，表明方法的精密度良好。

表1 精密度试验结果（n=6）%

3.3.2 稳定性试验

精密吸取甘草供试品溶液适量，按上述试验方法操作显色，测定吸光度值，8小时后再进行测定，结果表明，该显色反应稳定性良好[5]。

3.3.3 加样回收率试验

精密吸取甘草供试品溶液0.5ml，共4份，采用加样回收法，第1组为本底样品，第2，3，4组分别加入0.2mg/ml的芦丁标准溶液0.25ml，0.50ml，1.00ml，按上述试验方法操作，测定回收率，计算出平均回收率如下表2。

表2 加样回收率测定结果

3.3.4 四种中药材总黄酮的测定

精密移取上述黄芩、甘草样品各1.00ml，金银花样品0.1ml，葛根样品4ml，分别置10ml具塞刻度试管中，按上述试验方法操作，在508nm处测定吸光度，每个样品重复测定2次，得到中药材提取物中总黄酮的含量，所得结果见表3。

表3 样品中总黄酮含量

4 结语

通过对云南常见中药材中总黄酮的加标回收率、精密度和稳定性试验，说明NaNO2-Al（NO3）3-NaOH分光光度法准确度高，简单快速，条件容易控制，可应用于多种中药材提取物中总黄酮的测定。乙醇可以较广泛地溶解各种黄酮，常用乙醇提取法提取总黄酮。