文│肖其伟（甘肃省酒泉市肃州区东洞镇人民政府）

2019年11月初，甘肃省酒泉市肃州区某规模化猪场发生疫情，主要是2周龄内仔猪出现大面积腹泻，部分仔猪有类似神经症状，且对猪群紧急免疫接种PRV弱毒疫苗后基本无效。对该场内死亡的仔猪进行剖检，无菌采集病变明显的组织样品，低温送至当地动物疫病专业检测实验室，进行细菌分离与病原诊断。其结果发现，出现疫情主要原因是猪链球菌、PCV2和PEDV混合感染所致，且分离得到菌株对氨苄西林、头孢噻肟和恩诺沙星等较敏感。

一、材料与方法

1.病料来源。该场仔猪腹泻严重，且伴随神经症状濒临死亡的2头仔猪肺、肾、小肠和淋巴结等组织发生病变。

2.主要试剂。PCR预混液、核酸染料、琼脂糖粉末、DL2000marker和cDNA反转录试剂盒等均购自宝生物工程（大连）有限公司；动物组织DNA/RNA核酸提取试剂盒购自郑州智杰生物技术有限公司；不同药敏纸片购自河北利华药业有限公司；普通琼脂培养基和鲜血琼脂培养基由本试验自配。

二、实验方法

1.细菌分离与鉴定。将75%酒精浸泡的手术刀擦拭干净并再次灼烧后，切开腹股沟淋巴结深处组织，用无菌接种后蘸取少量组织液在普通液体培养基中搅拌，将培养基在37℃的摇床（220转/分钟）培养12小时。其后，蘸取少量培养液分别在普通琼脂和鲜血琼脂培养基表面平板划线，置于37℃恒温箱内培养，16～24小时后观察培养基表面是否出现菌落，对获得的菌落进行革兰氏染色法，根据菌落形态学特征进行初步鉴定。……