莫荣艳，熊丽文，梁惠娟，黄 钰，黎益图，何 涛，覃 磊

（来宾市动物疫病预防控制中心 546100）

本实验应用液相阻断ELISA 检测方法检测猪血清样品80份，快速检测猪的O 型口蹄疫抗体效价≥1∶64 有多少份。 ELISA抗体效价与免疫动物攻毒保护的关系：猪的抗体效价≥1∶64,99%以上保护；抗体效价＜1∶4，不保护；效价在1∶4～45,50%保护。

1 材料和方法

检测样品：猪血清80 份（样品不能有溶血状态、受污染、破损、变质)，编号为DA1～DA80。

实验器材：酶标仪；37℃恒温箱；超纯水仪；移液器；配套移液枪尖；96 孔U 型微量血凝板；移液槽；吸水纸；检测试剂盒是中国农业科学院兰州兽医研究所口蹄疫病毒O 型抗体液相阻断ELISA 检测试剂盒。

2 试剂准备

将口蹄疫病毒O 型抗体液相阻断ELISA 检测试剂盒从冰箱取出，放置常温解冻，试剂恢复常温后使用。 打开超纯水仪，取出2L 超纯水装在容器备用，按照检测试剂盒说明书，配制25倍PBST 浓缩液，用超纯水稀释成1 倍PBST（例如：1mL 浓缩液加入24mL 超纯水）。 打开恒温箱电源，设置温度到37℃，温度上升到37℃才能按实验要求正常工作。 配制口蹄疫O 型病毒抗原：按照抗原配制比例,用PBST 稀释液稀释到工作浓度（1∶25，即1mL 病毒抗原加24mL PBST 稀释液）。

3 实验操作步骤

3.1 稀释血清 80 份血清需要96 孔U 型微量血凝板共5块，在血凝板边缘标记数字（横向标记为1,2-12，纵向标记为A,B-H），一块板可以稀释16 份血清样品。例如编号为DA1 的血清样品，先在血凝板上A1～A5 孔中入PBST 稀释液50μL，然后在第A1 孔加入血清样品50μL， 混匀后吸出50μL 移到第A2 孔，依次稀释到第A5 孔， 从第A5 孔中吸出50μL 移到抗原抗体反应板（例如放在A1 孔）。把所有样品稀释完后移到抗原抗体反应板，对样品所在的位置做好标记。……