代天 杨萍 刘波 张苏川

急性心肌梗死是引起人类死亡的常见的心血管疾病，其治疗原则是恢复缺血心肌的血流灌注[1]，但这同时也会加重心肌结构和功能的损伤，从而引起心功能降低、恶性心率失常等，即心肌缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤[2]。目前，临床治疗心脏缺血过程中，I/R损伤是一大难题。所以，探讨心肌I/R损伤的发病机制并在恢复血流灌注时减轻或者清除I/R损伤具有深远的现实意义。微小RNA(microRNA，miRNA)是一类小分子单链非编码RNA，其在心血管系统中的作用一直被广泛研究。如Zhang等[3]研究显示，I/R损伤后的H9C2细胞中miR-208a升高，促进miR-208a表达可增强细胞损伤并促进细胞凋亡。miR-1224-5p是miRNA家族成员，其参与细胞增殖、凋亡、氧化应激等过程[4,5]。但目前，miR-1224-5p对I/R损伤的影响还未知。StarBase在线网站预测显示，血红素加氧酶1(heme oxygenase 1，HMOX1)是miR-1224-5p的靶基因。HMOX1是血红素降解的起始酶和限速酶，在心肌I/R损伤中发挥保护作用[6]。本研究通过体外培养心肌细胞H9C2并模拟I/R损伤，探讨miR-1224-5p对心肌I/R损伤的影响及其是否通过调控HMOX1表达发挥作用。

1 材料与方法

1.1 细胞与实验试剂 大鼠心肌细胞H9C2，中国科学院上海生命科学研究所；胎牛血清(Fet al Bovine Serum，FBS)，杭州四季青公司；DMEM培养基，美国Gibco公司；胰蛋白酶和四甲基噻唑蓝染色法(methylthiazoletrazolium，MTT)，美国Sigma公司；Trizol试剂、逆转录试剂盒和PCR试剂盒，深圳晶美公司；HMOX1抗体，上海允麦生物科技有限公司；LiPofectamineTM 2000试剂盒，美国Invitrogen公司；miR-144-3p模拟物(mimics)、抑制剂及阴性对照，广州锐博生物有限公司；PCR引物序列，上海吉玛公司；BCA蛋白测定试剂盒，北京索莱宝公司；双荧光素酶活性检测试剂盒，美国Promega公司；……